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國標委發布《高致病性禽流感診斷技術》 新增RT-PCR等兩種檢測方法
2021年01月26日 08:47:47 來源:化工儀器網 點擊量:5787

近日,國家市場監督管理總局國家標準化管理委員會正式發布《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2020)國家標準,新增RT-PCR等兩種檢測方法。

  【化工儀器網 時事熱點】2020年12月初,法國農業部發表聲明中,法國國家衛生安全署(ANSES)參考實驗室確認,該國西南部一家養殖場有6000只鴨子感染H5N8型病毒,并發現大量鴨子迅速死亡。2021年1月6日,法國農業部后續通報,該國朗德省(Landes)養禽場發生22起家禽H5N8亞型高致病性禽流感疫情,5121只家鴨和珍珠雞感染,274只死亡,2.5萬只被撲殺。
 
  近幾年,H5N8型病毒已先后在歐洲以及日本、韓國、中國臺灣等多個國家和地區均發生過規模化爆發,引發了多方關切。
 
  為保護我國畜牧業安全,加強高致病性禽流感的診斷技術,確保第一時間發現疫情,做到可防可控。近日,國家市場監督管理總局國家標準化管理委員會正式發布《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2020)國家標準,該標準由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所、中華人民共和國北京海關、中國動物衛生與流行病學中心等單位負責起草。
 
  標準規定了高致病性禽流感臨床診斷,樣品采集、保存與運輸,病毒分離與鑒定,血凝和血凝抑制劑試驗,禽流感病毒RT-PCR試驗和禽流感病毒熒光RT-PCR試驗的技術要求。
 
  本標準將代替《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2003)標準,與舊標準相比,新標準在技術方面出現幾點變化:一是增加了禽流感病毒RT-PCR試驗; 二是增加了禽流感病毒實時熒光RT-PCR試驗;三是刪除了瓊脂凝膠免疫擴散(AGID)試驗;四是刪除了間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。
 

 
  此次新增的禽流感病毒RT-PCR試驗和熒光RT-PCR試驗主要適用于檢測禽組織、分泌物、排泄物等物質中的禽流感病毒核酸。
 
  目前 PCR 技術只能擴增 DNA 模板,對 RNA 模板不能直接擴增。 mRNA反轉錄生成的 cDNA 可作為 PCR 的模板進行擴增,這種在 mRNA 反轉錄后進行的 PCR 擴增稱為 RT-PCR 。 其特點是雜交靈敏度高,對 RNA 的質量要求較低,操作簡便。目前該技術廣泛應用于分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統等科研中。
 
  而實時熒光RT-PCR(熒光定量聚合酶鏈式反應)指的是在PCR進行的同時,對其過程進行實時監測的能力,數據可在PCR擴增過程中進行收集,而非在PCR結束之后,反應以循環中首次檢測到目標擴增的時間點為特征,而非在一定循環數后目標分子累計的擴增量。目標核酸的起始拷貝數越高,則會越快觀察到熒光的顯著增加。相反,終點法檢測(也稱 “讀板檢測”)測量的是PCR循環結束時累計的PCR產物量。
 
  在儀器設備方面,新標準對適用儀器PCR擴增儀及配套反應管、高速臺式冷凍離心機、生物安全柜、微量移液、熒光PCR儀等的配備要求及操作規范做了清晰的介紹。
 
  標準是科學、技術及實驗經驗的總結。每一項標準的出臺都是因時因需而生,標準的制定為某個領域在一定范圍內達到秩序起到良好的規范作用。時隔18年,《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2020)國家標準的發布,對于高致病禽流感病毒的檢測工作具有重要的技術指導意義。
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