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藥品質(zhì)量檢測(cè)方法:柱色譜法
2022年08月24日 15:24:14 來(lái)源:化工儀器網(wǎng) 作者:小王 點(diǎn)擊量:5313

柱色譜法是在一根玻璃管或金屬管中迸行的色譜技術(shù),用來(lái)分離大多數(shù)有機(jī)化合物,尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。柱色譜法分離容量能從幾毫克到百毫克級(jí),所以,適用于分離和精制較大量的樣品。而柱色譜法細(xì)分又可以分成吸附柱色譜和分配柱色譜兩種。

  【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】柱色譜法是在一根玻璃管或金屬管中迸行的色譜技術(shù),用來(lái)分離大多數(shù)有機(jī)化合物,尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。柱色譜法分離容量能從幾毫克到百毫克級(jí),所以,適用于分離和精制較大量的樣品。而柱色譜法細(xì)分又可以分成吸附柱色譜和分配柱色譜兩種。
 
  吸附柱色譜的色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端(帶或不帶活塞)縮口的硬質(zhì)玻璃管,端口或活塞上部鋪墊適量棉花或玻璃纖維,管內(nèi)裝入顆粒應(yīng)盡可能大小均勻的吸附劑(顆粒直徑若沒(méi)有特殊規(guī)定,一般采用 0.07~0.15mm)。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時(shí)的流速,均按各品種項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行選擇。
 
  在吸附柱色譜中,吸附劑是固定相,洗脫劑是流動(dòng)相,基于各組分與吸附劑間存在的吸附強(qiáng)弱差異,通過(guò)使之在柱色譜上反復(fù)進(jìn)行吸附、解吸、再吸附、再解吸的過(guò)程,完成分離。因此,吸附柱色譜吸附劑的填充是一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)。
 
  一般來(lái)說(shuō),吸附劑的填裝分為干法和濕法兩種。干法是將吸附劑一次加入色譜柱,振動(dòng)管壁使其均勻下沉,然后沿管壁緩緩加入洗脫劑。若色譜柱本身不帶活塞,可在色譜柱下端出口處連接活塞,加入適量的洗脫劑,旋開(kāi)活塞使洗脫劑緩緩滴出,然后自管頂緩緩加入吸附劑,使其均勻地潤(rùn)濕下沉,在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。操作過(guò)程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。
 
  濕法是先將吸附劑與洗脫劑混合,攪拌除去空氣泡后,再徐徐傾入色譜柱中,然后加入洗脫劑將附著在管壁的吸附劑洗下,使色譜柱面平整。俟填裝吸附劑所用洗脫劑從色譜柱自然流下,至液面和柱表面相平時(shí),即加供試品溶液。
 
  加入供試品時(shí)也需要注意,除另有規(guī)定外,應(yīng)先將供試品溶于開(kāi)始洗脫時(shí)使用的洗脫劑中,再沿管壁緩緩加入,并且不能使吸附劑翻起。也可將供試品溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲信c少量吸附劑混勻,再使溶劑揮發(fā)去盡使呈松散狀,加在已制備好的色譜柱上面。如供試品在常用溶劑中不溶,可將供試品與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。
 
  洗脫同樣不能馬虎。除另有規(guī)定外,通常按洗脫劑洗脫能力大小遞增變換洗脫劑的品種和比例,分部收集流出液,至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時(shí),再改變洗脫劑的品種和比例。操作過(guò)程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。
 
  分配柱色譜的操作方法與吸附柱色譜基本一致。不顧偶需要注意的是,裝柱前,應(yīng)先將固定液溶于適當(dāng)溶劑中,加入適宜載體,混合均勻,待溶劑完全揮干后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊。供試品可溶于固定液,混以少量載體,加在預(yù)制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和,以避免洗脫過(guò)程中固定液的流失。
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