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迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法

閱讀:1133      發布時間:2022-3-10
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  迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項可有助于PCR中引物退火優化的功能。 梯度設定的目的是在模塊之間實現變化的溫度,通過每列之間≥2°C的間隔溫度升降,使得可同時對于一系列的溫度進行測試以獲取引物退火溫度。該技術的一種形式便是設計帶有三個或更多分割金屬模塊的PCR儀,每一模塊都具有獨立的加熱和冷卻元件。 相比于梯度模塊,該模塊設計可帶來活設置三種或更多不同溫度的能力,以便使得每個獨立的區域都能進行更好的溫度控制,特別是在優化過程中。
  獨立金屬模塊的絕熱性阻止了模塊之間的熱交換。 這就可實現更為準確的模塊溫度控制,確保模塊之間實現線性的溫度變化。
  迷你梯度PCR儀分析方法:
  ·凝膠電泳分析:PCR產物電泳,EB溴乙錠染色紫外儀下觀察,初步判斷產物的特異性。PCR產物片段的大小應與預計的一致,特別是多重PCR,應用多對引物,其產物片斷都應符合預評的大小,這是起碼條件。
  ·瓊脂糖凝膠電泳:通常應用1~2%的瓊脂糖凝膠,供檢測用。
  ·聚丙烯酰胺凝膠電泳:6~10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好,條帶比較集中,可用于科研及檢測分析。
  ·酶切分析:根據PCR產物中限制性內切酶的位點,用相應的酶切、電泳分離后,獲得符合理論的片段,此法既能進行產物的鑒定,又能對靶基因分型,還能進行變異性研究。
  ·分子雜交:分子雜交是檢測PCR產物特異性的有力證據,也是檢測PCR產物堿基突變的有效方法。

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