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實時熒光定量PCR儀工作原理解析

時間:2018/3/27閱讀:6221
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實時熒光定量PCR儀工作原理解析

實時熒光定量PCR儀廣泛應用于各級各類醫(yī)療機構、大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。實時熒光定量pcr儀由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。

實時熒光定量Pcr儀主要工作原理:

標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環(huán),并遵守聚合酶鏈反應規(guī)律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,被擴增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得CT值,同時利用數(shù)個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數(shù)。

工作原理解析圖:

實時熒光定量PCR儀工作原理解析圖

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