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Haematologic HCBT-0022說明書

2018-10-25  閱讀(805)

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Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業從事體外研究用高質量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯中涉及的蛋白質,以及骨代謝的調節。HTI產品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質,包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務包括定制蛋白質純化,蛋白質修飾,化驗開發,合同制造和合同研究。

 

haemtech Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業從事體外研究用高質量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯中涉及的蛋白質,以及骨代謝的調節。HTI產品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質,包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務包括定制蛋白質純化,蛋白質修飾,化驗開發,合同制造和合同研究。

 

Haematologic HCBT-0022說明書

 

 

凝血酶(β,γ)

蛋白水解形式的α-凝血酶
上文說明了人α-凝血酶向較低活性形式的降解模式。通過在Arg106-Tyr107鍵處切割完整的B鏈產生β-凝血酶,產生B1和B2片段。通過在Lys190-Gly191鍵處進一步切割β-凝血酶B2鏈產生γ-凝血酶,產生B4和B5片段。盡管未示出,但B3片段是通過在Lys190-Gly191鍵處切割完整B鏈而衍生的潛在中間體,產生通常稱為β'-凝血酶的產物。(此處使用的氨基酸編號始于A鏈的NH2末端并繼續通過B鏈)。

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 HCBT-0022 人體β凝血酶

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尺寸

100微克

公式

的10mM磷酸鈉4,0.3M NaCl,pH為6.5

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存儲

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

  •  

活動決定

纖維蛋白原凝血試驗

保質期(妥善保存)

12個月

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 HCGT-0021 人類γ凝血酶

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尺寸

100微克

公式

的100mM磷酸鈉4,0.1%PEG,pH 6.5的

  •  

存儲

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

  •  

活動決定

纖維蛋白原凝血試驗

保質期(妥善保存)

12個月

  •  

α-凝血酶是通過酶原凝血酶原的蛋白水解活化產生的高度特異性絲氨酸蛋白酶(1)。已經顯示純化形式的α-凝血酶(2-4)在長期儲存時經歷自溶作用至較低活性形式。在用胰蛋白酶(5)有限消化α-凝血酶時觀察到類似的失活。這些蛋白水解形式的α-凝血酶被稱為β-凝血酶和γ-凝血酶。通過在Arg106-Tyr107鍵處切割B鏈產生人β-凝血酶。通過在Lys190-Gly191鍵處進一步切割β-凝血酶B2鏈產生γ-凝血酶。通過在Arg-154處單個裂解凝血酶形成另一種形式的蛋白水解凝血酶,稱為β'-凝血酶。γ-凝血酶通過B鏈中這兩個位點(Arg70 / 73和Arg-154)的蛋白水解切割產生。這些切割導致不再共價連接到凝血酶分子上的肽的釋放,但通過離子交換和凝膠過濾色譜保持相關。這些蛋白水解形式的凝血酶保留了切割小合成底物(6,7)和一些蛋白質底物如因子XIII(8),抗凝血酶III(9)和凝血酶原(10)的能力。它們凝固纖維蛋白原(11),裂解血小板反應蛋白(12)或激活蛋白C(9)的能力已顯著降低。

通過TPCK處理的胰蛋白酶的有限蛋白水解,基本上通過Braun等人的方法,由純化的α-凝血酶制備人β-凝血酶和γ-凝血酶。(5)。蛋白水解形式的α-凝血酶在100mM NaH 2 PO 4,pH 6.5緩沖液中提供,應儲存在-20℃。通過SDS-PAGE評估純度,并使用纖維蛋白原凝固測定評估活性。

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人β和γ凝血酶,每通道1μg

緩沖

MES

標準

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(188 kDa),磷酸化酶B(98 kDa),BSA(62 kDa),谷氨酸脫氫酶(49 kDa),酒精脫氫酶(38 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌紅蛋白紅(17 kDa),溶菌酶(14 kDa),抑肽酶(6kDa),胰島素,B鏈(3kDa)。

注意

其他污染物來自凝血酶,并且可以占額外帶質量的~5%。

 

行動方式

蛋白水解形式的 - 凝血酶,其保留對小底物,因子XIII和凝血酶原的活性,但對纖維蛋白原,蛋白C活化和抗凝血酶III結合的活性降低。

分子量

36700(B-凝血酶)
36700(G-凝血酶)
4000(A鏈)* 
34300(B鏈)* 
6000(B1鏈)* 
10400(B5鏈)* 
11800(B4鏈)* 
*通過SDS測定的表觀分子量-PAGE分析

消光系數

Ë

1%

1厘米,280納米

 

= 18.3

 

結構體

b-凝血酶:三條鏈(A,B1,B2),A鏈和B2鏈??之間的二硫鍵。g-凝血酶:四條鏈(A,B1,B5,B4),在A肽和B5肽之間具有二硫鍵。

 

 

 

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