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Targeting Systems DLAR-4說明書
雙熒光素酶測定試劑測定鯉魚和高斯熒光素酶活性
目錄號。
大小
描述
價格
DLAR-4
1000次化驗
Gaussia/Cypridina雙熒光素酶檢測試劑
$850.00
這種雙熒光素酶分析試劑有兩種成分——i）用于測量高斯熒光素酶的高斯熒光素酶分析試劑和用于測量鯉魚熒光素酶活性的VLAR-2
工具包內容
1.100倍柯倫他嗪（儲存溫度為-20°C）
2.高斯熒光素酶分析稀釋緩沖液（儲存于4°C）
3.100x Cypridina熒光素底物（在-80°C下儲存）
4.Cypridina底物稀釋緩沖液（在4°C下儲存）
5.VLAR-2緩沖液（塞浦路斯熒光素酶分析緩沖液）（儲存于4°C）
優勢
·¨Cypridina熒光素酶和Gaussia熒光素酶在轉染細胞的上清液和裂解液中都具有非常強的信號。因此，可作為雙重分泌報告者或雙重細胞內報告者使用。
·¨天然鯉魚（Vargula）熒光素酶和高斯熒光素酶具有天然分泌信號，表達后有效分泌到細胞培養基中。測定熒光素酶不需要細胞裂解。
·¨Cypridina熒光素酶比螢火蟲/腎素熒光素酶亮20-30倍，具有最高的轉換數和比常用螢火蟲熒光素酶更高的生物發光信號強度，使其成為理想的轉錄報告者（1）。
·¨Gaussia熒光素酶分析系統的穩定劑組件在較長時間內提供穩定的動力學，為用戶提供高通量分析和手動交付分析所需的時間。
·¨分泌的塞浦路斯熒光素酶蛋白穩定，具有*的光產生活性，允許進行非常敏感的分析（1,2）。
·¨同時含有CLuc和分泌型高斯熒光素酶（即轉染后的生長培養基或細胞裂解物）的樣品可在-20°C下長期儲存。
描述：一組經過改進的超敏感分泌型熒光素酶報告子已被開發出來，用于分析同一組轉染細胞中不同的啟動子活性。這種方法不僅可以分析同一組細胞中的三條或多條通路（反應），而且還可以在不殺死細胞的情況下實時研究反應（因為這三條反應器是分泌的）。靶向系統提供了許多不同的細胞內和分泌型雙熒光素酶分析試劑。Cycprida–Gaussia熒光素酶分析系統特別有吸引力，因為Cypprida熒光素酶和Gaussia熒光素酶在細胞內和分泌部分都具有強大的活性。當使用該試劑進行分析時，它們都具有穩定的生物發光信號。
塞浦路斯（瓦古拉）熒光素酶：
Cypridina熒光素酶（以前稱為Vargula熒光素酶）來自海洋介形類Vargula Hilgendorfi或Cypridina Noctilucus，是一種分泌型熒光素酶，最大發射波長為460nm。它的亮度大約是螢火蟲熒光素酶的20-30倍。擁有最高的營業額。與螢火蟲熒光素酶不同，Cypridina-lcufierase不需要ATP，并催化其*底物Cypridina-luciferin的氧化，如前所述
圖1:Cypridina熒光素酶催化的光化學反應。
Cypridina熒光素不同于腔烯特拉嗪，腔烯特拉嗪是雷尼拉、高斯和Metridia熒光素的底物。由于其*的底物和明亮的分泌型熒光素酶活性，Cypridina熒光素酶在涉及Gaussia、Renilla或Firefly熒光素酶的多重檢測中特別有用。分泌型CLuc是一種非常穩定的蛋白質。由于這一特性，從上清液中測得的活性反映了在取樣之前累積的蛋白質量。塞浦路斯熒光素酶是由細胞自然分泌的（圖2）。因此，細胞裂解對于熒光素酶活性的測定是不必要的。
高斯熒光素酶：關于高斯熒光素酶：
高斯熒光素酶（GLuc）是海洋橈足類高斯熒光素酶（1,2）。這種不需要ATP的熒光素酶在產生光的反應中催化底物柯倫他嗪的氧化，與其他發光報告基因相比，它具有相當大的優勢，例如分泌性和更亮的信號強度，以及生物發光信號的穩定性（約10%在一小時內衰減）。從轉染了表達GLuc的質粒的培養細胞上清液中測得的發光與產生的酶量成正比，這反過來又反映了轉錄水平。或者，可以使用細胞裂解物進行分析。雖然大部分活性是分泌的，但高斯熒光素酶的高靈敏度也允許從細胞裂解物中進行測量。
使用Gaussia熒光素酶分析試劑（GAR-1或DLAR-4組分1）試劑的天然GLuc生物發光信號動力學：使用靶向系統的GAR-1試劑測量細胞上清液（轉染Gaussia熒光素酶表達載體）中的Gaussia熒光素酶活性
圖2b：光發射動力學。使用塞浦路斯熒光素酶分析試劑（VLAR-2或DLAR-4組分2）瞬時轉染pCMV-VLuc表達載體的HEK 293細胞上清液評估塞浦路斯熒光素酶生物發光信號的穩定性
該試劑適用于需要分析大量樣品的高溫超導應用。在沒有穩定器的情況下，信號強度最初略高，但衰減速度比有穩定器時快。
注：數據是在Turner TD2020光度計上測量的三次測定的平均值。
