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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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上海起發(fā)genelink 26-4000-03說(shuō)明書
Random Primers Unlabeled
數(shù)量100μg
運(yùn)輸條件下 室溫
儲(chǔ)存-20攝氏度
描述
隨機(jī)引物是代表該大小的所有可能序列的寡核苷酸的混合物。與使用六聚體（1,2）和cDNA合成類似，隨機(jī)引物可用于在低聚物標(biāo)記中引發(fā)合成。
隨機(jī)引物標(biāo)記產(chǎn)生高比活性標(biāo)記DNA探針，可用于所有南方、北方和原位雜交研究。隨機(jī)引物也可以類似于在cDNA合成中使用六聚體與寡聚體d（T）組合來(lái)產(chǎn)生更多的5'端cDNA序列。
最近，隨機(jī)引物被用來(lái)檢測(cè)DNA多態(tài)性。這些多態(tài)性，簡(jiǎn)單地被檢測(cè)為DNA的片段，從父母一方擴(kuò)增而不是從另一方擴(kuò)增，是以孟德爾的方式遺傳的，可以
可用于構(gòu)建多種物種的遺傳圖譜。作者建議，這些多態(tài)性被稱為RAPD（發(fā)音快速）標(biāo)記，在隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA之后（3）。
重建
建議在無(wú)核糖核酸酶的DEPC處理水中以50µM（50 pmol/µl）的濃度或10mM Tris pH 8.0進(jìn)行重組。儲(chǔ)備溶液可根據(jù)需要進(jìn)一步稀釋至適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛取?br/>為了制備50μM的底漆溶液，使用凍干低聚物的“nmol/100µg"值并乘以20，以確定要添加的稀釋液體積（以微升計(jì)）。
公式：
“總nmol"x 20=要添加的稀釋劑μl。
-短時(shí)間旋轉(zhuǎn)試管，將運(yùn)輸過(guò)程中可能卡在瓶蓋中的試管內(nèi)容物卸下。
顆粒可能非常小，不可見(jiàn)。
-直接向試管中加入適量的無(wú)核糖核酸酶水或10mM Tris pH 8.0。旋渦。
-上述溶液為50µM。這相當(dāng)于50 pmol/µl。
熒光標(biāo)記探針應(yīng)避光，以避免光漂白。
在零下20點(diǎn)儲(chǔ)存
重建后C或以下。
推薦用法
在20µl反應(yīng)體積中，使用4µl 50µM溶液中的1µg DNA或RNA作為模板。
詳見(jiàn)反應(yīng)條件。
質(zhì)量控制數(shù)據(jù)
該產(chǎn)品通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶和聚（A）蛋白被證明能引發(fā)第一鏈cDNA反應(yīng)+
RNA作為模板
使用klenow DNA聚合酶在隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)中進(jìn)行探針標(biāo)記。
功能分析條件
下面給出的條件已經(jīng)過(guò)測(cè)試，以產(chǎn)生第一鏈cDNA合成，并給出了一個(gè)例子。使用該產(chǎn)品的其他實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)使用了各種變體和其他方案，以產(chǎn)生出色的第一鏈合成。研究人員可以替代他們自己的反應(yīng)條件。
RNA的質(zhì)量對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)非常重要。必須有完整的全長(zhǎng)RNA作為模板材料，不含微量RNA酶和污染性化學(xué)物質(zhì)。低質(zhì)量的RNA模板通常是導(dǎo)致cDNA產(chǎn)物截短和不完整的原因。
