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凝膠電泳操作注意事項

閱讀:4804        發(fā)布時間:2021-1-29
1.選用優(yōu)質(zhì)的瓊脂糖:不同品牌的瓊脂糖在質(zhì)量上有較大的差異。劣質(zhì)瓊脂糖會導致DNA條帶模糊,甚至條帶缺失。因此請盡量選擇質(zhì)量穩(wěn)定可靠的品牌。

2.選擇適當?shù)哪z濃度:
瓊脂糖凝膠的線性DNA分辨范圍
 3.凝膠制備:配制凝膠和電泳應(yīng)選用相同的1x緩沖液;使用的容器體積至少是凝膠溶液的3倍,以免溶液沸騰時溢出;制膠過程中盡量趕除氣泡;根據(jù)樣品的濃度和體積選擇適當大小的梳子。

4.選擇適當?shù)碾娪揪彌_液:GenStar® SD緩沖液(Cat. No. E101-50)和TBE緩沖液適用于分離比較小的DNA段,TAE緩沖液(Cat. No. E102-50)適用于分離比較大的DNA段;緩沖液應(yīng)及時更新;膠回收純化應(yīng)使用新鮮配制的1x電泳緩沖液,以防核酸酶和DNA雜帶污染。

5.核酸樣品的準備:提取的DNA樣品應(yīng)去除蛋白和多余的鹽分等雜質(zhì);PCR樣品應(yīng)盡量在24小時內(nèi)電泳檢測,否則條帶容易模糊。

6.上樣緩沖液:所有泳道應(yīng)使用相同的上樣緩沖液,以防止因離子強度不同造成條帶遷移率偏差。

7.適量上樣:上樣過多會導致上樣孔超載,出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象;上樣體積過小可能導致條帶亮度不均。

8.電壓及電泳時間:根據(jù)電泳槽型號、凝膠濃度、電泳緩沖液種類和目的條帶大小等選擇適當?shù)碾妷汉碗娪緯r間。使用GenStar®SD電泳緩沖液時,電壓設(shè)置為20~35 v/cm膠長;使用TAE或TBE緩沖液時,電壓以不超過20 v/cm膠長為宜。

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