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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司資料大小
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376次genaxxon S5301.0250說(shuō)明書(shū)
Order number: S5301.0250
該病毒 RNA 和 DNA 制備試劑盒旨在快速有效地從各種病原體生物(如病毒或細(xì)菌)中分離 RNA 和 DNA。樣本可以是新鮮或冷凍的血漿/血液(用抗凝劑 EDTA、檸檬酸鹽或 ACD 處理)、血清、其他無(wú)細(xì)胞體液或病原體感染的組織。該試劑盒專門(mén)設(shè)計(jì)用于使用低洗脫體積分離高質(zhì)量核酸,并允許進(jìn)行靈敏的下游分析,包括定量 PCR 和 RT-PCR。純化的 RNA/DNA 不含蛋白質(zhì)和核酸酶。病毒 RNA 和 DNA 制備試劑盒使用包含離液鹽的裂解緩沖液來(lái)滅活 RNases/DNases,并使用先進(jìn)的硅膠膜技術(shù)快速純化完整的 RNA/DNA。
優(yōu)化了制備程序,可在 30 分鐘內(nèi)提供可重現(xiàn)的結(jié)果。
制備程序:
從血漿、血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、無(wú)細(xì)胞液體或病毒感染組織中制備
將 150 µL 血漿、血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、無(wú)細(xì)胞液體或病毒感染組織轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 微管中.
注意:使用 PBS 緩沖液將較低的樣品體積調(diào)整為 150µL。更大體積(高達(dá) 300 µL)的樣品可以輕松放大,但可能需要更大的管用于裂解過(guò)程。
加入 300µL(2 個(gè)樣品體積)的裂解緩沖液。
渦旋 15 秒。
在室溫 (20°C - 25°C) 下孵育 10 分鐘。
加入 300µL(2 倍樣品體積)結(jié)合緩沖液,輕輕渦旋混合均勻。
從鼻腔或咽喉拭子制備
將 150µL PBS 緩沖液轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 微管中。
添加 300µL 裂解緩沖液。
用收集到的鼻腔或喉嚨細(xì)胞切斷 cutton端, 并將其放入微管中。
關(guān)閉管子并渦旋 15 秒。
在室溫 (20°C - 25°C) 下孵育 10 分鐘。
加入 300µL 結(jié)合緩沖液,輕輕渦旋混合均勻。
純化程序
色譜柱裝載
將離心柱放入提供的 2mL 收集管中。
將裂解液加載到柱子上,并以 13,000 g 離心 1 分鐘。
注意:色譜柱儲(chǔ)液器的最大體積為 800μL。對(duì)于較大的樣品體積,丟棄流通液并再次加載色譜柱/旋轉(zhuǎn)。
丟棄收集管中的流通液,并將色譜柱放回同一管中。
柱洗滌
在 Spin Column 中加入 500µL Washing Buffer A 并以 13,000 g 離心 1 分鐘。
丟棄收集管中的流通液,并將 Spin Column 放回同一管中。
將 500µL 洗滌緩沖液 B 添加到 Spin Column 并以 13,000 g 離心 1 分鐘。
注意:在第一次使用洗滌緩沖液 B 之前,按照瓶子上的指示添加乙醇。
丟棄收集管中的流通液,并將 Spin Column 放回同一管中。
以 13,000 g 離心 1 分鐘。
注意:干燥膜很重要,因?yàn)闅埩舻囊掖伎赡軙?huì)干擾下游反應(yīng)。
洗脫
將 Spin Column 放入新的 1.5 ml 微管(未提供)中。
將 30-60µL Elution Buffer 直接加入離心柱的膜上。
注意:避免用移液器吸頭接觸膜。
在室溫下孵育 1 分鐘。
以 13,000 g 離心 1 分鐘。
洗脫的 RNA 和/或 DNA 可用于下游處理或在 -80°C 下儲(chǔ)存。
使用 2-5µL 作為 PCR 或 RT-PCR 的模板。
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