使用FAM FLICA Caspase-1檢測(cè)試劑盒檢測(cè)caspase-1活性。該體外測(cè)定采用熒光抑制劑探針FAM-WEHD-FMK標(biāo)記活細(xì)胞中的活性caspase-1酶。使用熒光顯微鏡，熒光板讀數(shù)器或流式細(xì)胞儀分析樣品。

 分類：細(xì)胞凋亡，Caspase-1，胱天蛋白酶，FLICA®

胱天蛋白酶在細(xì)胞凋亡和炎癥中起重要作用。研究人員使用ICT的FLICA檢測(cè)試劑盒，以通過胱天蛋白酶在培養(yǎng)的細(xì)胞和組織中定量凋亡的方法。FAM FLICA Caspase-1探針使研究人員能夠評(píng)估caspase-1的激活。

FLICA試劑FAM-WEHD-FMK進(jìn)入每個(gè)細(xì)胞，并與激活的caspase-1不可逆地結(jié)合。由于FAM-WEHD-FMK FLICA試劑與活性酶共價(jià)偶聯(lián)，因此保留在細(xì)胞內(nèi)，而任何未結(jié)合的FAM-WEHD-FMK FLICA試劑則擴(kuò)散出細(xì)胞并被沖洗掉。剩余的綠色熒光信號(hào)是添加試劑時(shí)細(xì)胞中存在的活性caspase-1酶活性的直接量度。包含結(jié)合的FLICA的細(xì)胞可以通過熒光酶標(biāo)儀，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。可以立即讀取用FLICA試劑標(biāo)記的細(xì)胞，或使用試劑盒中包含的固定劑保存16小時(shí)。未固定的樣品也可以分別用碘化丙錠或Hoechst 33342進(jìn)行分析，以檢測(cè)壞死或核形態(tài)的變化。

1.準(zhǔn)備樣品和對(duì)照
2.用diH 2 0稀釋10X細(xì)胞凋亡洗滌緩沖液1:10。3 
.用50μLDMSO稀釋FLICA 。
4.加入200μLPBS稀釋FLICA 1：5。
5.以1:30的比例將稀釋的FLICA加到每個(gè)樣品中（例如，將10μL加到290μL培養(yǎng)的細(xì)胞中）。
6.孵育大約1小時(shí)。
7.取出培養(yǎng)基并洗滌細(xì)胞3次：添加1X細(xì)胞凋亡洗滌緩沖液并旋轉(zhuǎn)細(xì)胞。
8.如果需要，用其他污漬標(biāo)記，例如Hoechst，碘化丙啶，7-AAD或抗體。
9.如果需要，固定單元格。
10.用熒光顯微鏡，熒光板讀數(shù)器或流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。FAM-FLICA在492 nm處激發(fā)，并在520 nm處發(fā)射。

如果使用貼壁細(xì)胞，請(qǐng)參閱手冊(cè)以了解其他方案。

ICT的FAM-FLICA Caspase-1（WEHD）試劑盒（＃9162）用于檢測(cè)THP-1單核細(xì)胞的凋亡。用FAM-WEHD-FMK標(biāo)記細(xì)胞，先用陰性對(duì)照（DMSO）或LPS（1 µg / mL，3小時(shí)）處理，再用尼古丁（20 µM，30分鐘）處理，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。處理后，將細(xì)胞洗滌并重懸于PBS + 0.5％BSA中。然后將細(xì)胞用Hoechst 33342染色，固定并使用配備了EGFP（Ex 470/30，Em 530/50）和DAPI（Ex 375/28，Em 460/50）LED的Logos iRiS數(shù)字細(xì)胞成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察以20倍的尺寸過濾立方體。與DMSO模擬處理的細(xì)胞（下部的圖像）相比，在LPS +尼日利亞霉素處理的細(xì)胞（上部的圖像）中觀察到綠色FAM-FLICA染色水平升高（最左側(cè)的圖像）。還顯示了Hoechst 33342染色（中間圖像）以及EGFP和DAPI通道的覆蓋圖（最右邊的圖像）。

 •試劑名稱：FAM-WEHD-FMK 
•目標(biāo)：Caspase-1 
•激發(fā)/發(fā)射：492 nm / 520 nm 
•分析方法：流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡，熒光板讀數(shù)器
•樣品類型：細(xì)胞培養(yǎng)
•儲(chǔ)存：2 -8°C 
•運(yùn)送：過夜（國(guó)內(nèi)）運(yùn)送，國(guó)際優(yōu)先運(yùn)送

試劑盒9161：25個(gè)測(cè)試
•FLICA Caspase-1試劑（FAM-WEHD-FMK），1小瓶，＃6708 
•10X細(xì)胞凋亡洗滌緩沖液，15 mL，＃635 
•固定劑，6 mL，＃636 
•碘化丙錠，1 mL， ＃638 
•Hoechst 33342，1 mL，＃639 
•試劑盒手冊(cè)

試劑盒9162：100個(gè)測(cè)試
•FLICA Caspase-1試劑（FAM-WEHD-FMK），4個(gè)樣品瓶，＃6708 
•10X細(xì)胞凋亡洗滌緩沖液，60 mL，＃634 
•固定劑，6 mL，＃636 
•碘化丙錠，1 mL， ＃638 
•Hoechst 33342，1 mL，＃639 
•試劑盒手冊(cè)