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DAB顯色試劑盒(20×)?:二氨基聯苯胺(Diaminobenzidine,DAB)是過氧化物酶(POD)的顯色底物,DAB顯色液主要用于免疫過氧化物酶法,適用于辣根過氧化物酶HRP標記的免疫印記或免疫組化反應。過氧化物酶催化底物發生反應,于反應部位產生棕色沉淀物。免疫印記可直接在膜上顯示條帶;免疫組化標本顯色時間一般為室溫5-20分鐘,隨后在顯微鏡下觀察顯色的情況,顯色充分后應將標本及時脫水封固。其終產物可直接在光鏡下觀察,也可經OsO4處理后,增加反應產物的電子密度,用于電鏡觀察。
DAB顯色試劑盒(20×)
DAB染色液的使用方法
1.DAB顯色液配制
10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基聯苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,顯色時加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用
2. 顯色
準備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。
3.加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)。
4. 置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育25分 鐘,避免光照(暗室操作),直棕褐色沉淀出現。
5.用鑷子夾起固相膜,放進無離子水里清洗。
6.空氣中晾干。
7. 拍照記錄 。
DAB顯色試劑盒(20×)DAB染色液的注意事項
1. DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出,應確保結晶*溶解再行使用;
2. 顯色工作液應現用現配,新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;
3. DAB在常溫下不穩定,每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實驗,或因滲漏造成實驗環境污染;
4. DAB有潛在致突變作用,操作時應注意穿戴好防護用具。