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上海希言科學儀器有限公司

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細胞類代謝組學樣本收集步驟

閱讀:5110      發布時間:2018-3-2
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適用細胞類型:哺乳動物細胞(CHO、NS0、CD-hybridoma 細胞系)

樣品量要求: 
1*10 7 cell/sample,提供 2 份樣本。  

樣本收集步驟:

1) 使用細胞計數器測定細胞數量,計算出所需淬滅緩沖液的量。下圖以細胞數量1*10 7 為例; 
NOTE:①使用50ml圓錐形管一次處理樣本zui大量為8ml,如果樣本量>8ml,就分開做;②淬滅過程時間敏感,兩個人操作。 

2) 將 5 倍樣本體積的淬滅緩沖液加入 50ml 圓錐形管中;

3) 在低溫恒溫器上預冷淬滅緩沖液至-40℃ (淬滅緩沖液:60%(v/v)甲醇+0.85%(wt/v)碳酸氫銨(pH7.4,使用 12M 的鹽酸進行 pH 調節)。如果沒有低溫恒溫器,可以使用干冰代替,并用低溫溫度計檢測溫度,保證每管都處于-40℃,溫度不能過低); 
NOTE: 由于單人操作,zui多 2 樣本/次,雙人操作,4 樣/次。保證淬滅處理迅速。因為時間要求“迅速”。 

4) 吸取 1 體積的細胞樣本(1*10 7 ),加入到盛有淬滅緩沖液的管中央。 NOTE: 溫度必須維持在-40℃左右,低于 45℃時,會導致細胞破碎。

5) 緩慢搖晃管子,混勻。 
NOTE: 禁止 Vortex 渦旋震蕩混勻!

6) 1000g 離心 1min; 

7) 去除上清。NOTE:當上清被去除干凈后,繼續貼壁吸取 5s 以保證上清*被去除,因為有些上清粘在壁上,回落的話,會對后繼操作帶來負面影響。

8) 使用 200μl -80℃的甲醇將細胞重懸,并轉移到 1.5ml 的離心管中,然后用液氮冰凍;

9) -80 度凍存。足量干冰寄送。  

注意事項: 

1)淬滅緩沖液 pH 值要在每次適用前重新測定調整。

2)溫度要控制好,強烈建議使用-40℃冰柜操作。  

參考文獻: 
Sellick C A, Hansen R, Stephens G M, et al. Metabolite extraction from suspension-cultured mammalian cells for global metabolite profiling.[J]. Nature Protocol, 2011, 6(8):1241-9.

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