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釀酒酵母感受態細胞的制備、轉化

閱讀:8389      發布時間:2019-1-25
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接下來喆圖小編給大家講講釀酒酵母感受態細胞的制備方法:

(1)從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養基,30℃,250 rpm 培養過夜。

(2)測定過夜培養物的OD600值為3.0~5.0之間。

(3)將10 ml YPD過夜培養物稀釋至OD600值為0.2~0.4。

(4)在28~30℃恒溫培養搖床中繼續培養3~6 hr,使其OD600值達到0.6~1.0。

(5)于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細胞,棄上清。

(6)用10 ml 洗液洗酵母細胞,隨后于室溫1500 g 離心5 min離 心收集細胞,棄上清。

(7)用1 ml TE/LiAc重懸酵母細胞,以每管50 μl 分裝。

接下來是釀酒酵母細胞的轉化

(1)取50 μl 感受態細胞,再加入待轉質粒各2 μl,混勻。

(2)加入500 μl 轉化用溶液(PEG/LiAc,二甲亞砜),彈擊管壁混勻。

(3)30℃恒溫培養搖床中恒溫1 h,隔15min彈擊管壁混勻。

(4)加入1毫升YPD培養液,30℃恒溫培養搖床中培養1小時。

(5)3500 g 離心5 min ,留沉淀,棄上清。

(6)沉淀用150 μl TE重懸,涂相應的SD平板放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養基里后,再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫實驗報告。觀察平板上長出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。

以上內容僅供參考,如需了解詳情,請聯系喆圖客服!

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