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細胞培養實驗
點擊次數：2586 發布時間：2021-12-15
細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個關鍵的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必要的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。
細胞培養實驗室組建的基本要求:
1、細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。
3、細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，為10萬級潔凈環境的潔凈室。而洗刷消毒工作設在潔凈室外，避免物品污染潔凈室內環境。細胞潔凈室需要一個空調系統并對外界保持一定的正壓。
4、解剖實驗室主要用于對器官組織的分離，需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡、各種手術器材等組織細胞培養室除一般實驗室的普通常規設備外，尚有一些特殊需要的設備。基本可分為兩大類：
I. 細胞培養實驗室常用的基本儀器設備
1.顯微鏡：倒置顯微鏡——是組織細胞培養室所必需的日常工作常規使用設備之一，便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。
2.培養箱：體外培養的細胞和體內細胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數情況下，最適溫度是37℃，溫差變化一般不應超過±0.5℃，細胞在溫度升高2℃ 時，持續數小時即不能耐受，40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養箱，如具有較高靈敏度的恒溫培養箱及CO2培養箱。
3.干燥箱：用于細胞培養箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置：細胞培養對水的質量要求較高，細胞培養以及與細胞培養工作相關的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。進行細胞培養時配制各種培養液及試劑等均需使用三次蒸餾水：即使是用于玻璃器皿的沖洗，也應使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱：細胞培養室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養液、生理鹽水等培養用的物品及短期保存組織標本。
b、低溫冰箱（-20℃）——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清等。
6.細胞冷凍儲存器：儲存器常用的是液氮容器。根據使用需要分為不同的類型及多種規格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小，取放使用方便及液氮揮發量（經濟）三種因素。
7.離心機：進行細胞培養時，常規需要進行制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作，通常需要使用實驗室離心機。一般可常規配置4000rpm的臺式離心機，例如細胞沉降，使用低速離心機即可，離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
8.天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器：一般為高壓蒸汽滅菌鍋，直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器：目前細胞培養工作中采用的培養用液，包括人工合成培養液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質，這些物質在高溫或射線照射下易發生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器，各種濾器有其使用原理和特點。
培養瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養、繁殖細胞。進行培養時培養瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養。
培養皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養皿規格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養板：為塑料制品。可供細胞克隆及細胞毒性等各種檢測實驗使用。其優點是節約樣本及試劑，可同時測試大量樣本，易于進行無菌操作。培養板分為各種規格，常用的規格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
II、細胞培養實驗室特殊設備
細胞培養實驗室除了應配備上述的常用基本設備以外，如有條件，可添置一些特殊或先進的設備儀器，以便更有效、更精確、更深入地進行實驗室工作。例如：
（1）酶聯免疫檢測儀——可用于進行免疫學測定及細胞毒性、藥物敏感性檢測等。
（2） 超低溫冰箱（-80℃）——便于儲存某些試劑及標本。
（3）旋轉培養器——用于某些特殊細胞或需要收獲大量細胞的培養。
（4） 熒光顯微鏡——進行熒光染色樣本的觀察。
（5） 流式細胞儀——可更精確及快速檢測細胞。
（6）用于檢測細胞培養條件的各種儀器，例如專門為快速分析細胞培養基中主要或關鍵營養成分、代謝產物及氣體含量設計的多功能細胞培養分析儀、手提式CO2濃度測定儀等。
2 細心+實驗條件允許
3 培養細胞需要有備份的條件下去嘗試新的培養方式，否則實驗失敗了導致細胞株也沒了。實驗記錄詳細完整也是很關鍵的
4.選擇合適的實驗室儀器。