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1. 選用原代細胞生長狀態好（90-95%），生長數量大于5×105進行傳代。
 
2. 吸除原代細胞培養液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養瓶2次。
 
3. 1ml細胞消化液加入細胞培養瓶，輕輕搖動，使細胞消化液覆細胞培養瓶底。
 
4. 細胞培養瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養箱靜置培養數分鐘后，在顯微鏡下觀察原代細胞的消化狀態。
 
請記住：如貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，用手指輕輕拍打細胞培養側部或底部至大部分貼壁細胞懸浮，加入細胞終止液，終止細胞消化。每種原代細胞的消化時間是有差異的。
 
5. 吹打培養瓶中懸浮細胞若干次，再吸出細胞懸浮液，轉入15ml離心管中，1000rpm離心5分鐘。
 
6. 棄離心管中液體，加入原代細胞培養液重懸細胞。細胞計數，確定細胞數量。
 
    細胞分瓶后，加入適量原代細胞培養液至細胞培養瓶中，置于5%CO2、95%空氣、37oC培養箱靜置培養24小時。