亚洲AV成人片无码网站玉蒲团,男人10处有痣是富贵痣,AV亚洲欧洲日产国码无码苍井空,日韩午夜欧美精品一二三四区

    本實驗要加入PSV2-neo、DNA與外源DNA共轉染受體細胞，這樣可使受體細胞獲得新霉素(neo)基因的抗藥性，這樣即使癌基因沒有出現明顯的“轉化灶”，也可測出轉入的外源性基因的抗neo的標記。而且還可利用被neo基因導入的受體細胞通過G418選擇培養篩選轉化的細胞建立細胞株。若以獲取 “轉化灶”為目的，可不加入PSV2-neo DNA只需將從癌細胞中提取的基因組DNA導入受體細胞即可，其方法如下： 

1.基因組DNA轉染： 

(1)配制磷酸轉染液 

NaCl 8.0g 

Hepes 5.0g 用時現配，pH很重要一定要控制在6.95±0.65 

Na2HPO4 0.099g 消毒滅菌 -20℃貯存備用 

加溫水至 1000mL 

(2)按前面介紹的方法提取癌細胞基因組DNA。 

(3)取供體基因組DNA50～100μg,加3M NaCl或醋酸鈉，使zui終濃度至0.3M混勻。 

(4)再加2倍體積無水乙醇3000r/min離心10分鐘，去上清。 

(5)加入轉染緩沖液，待DNA充分溶解后，再加入2.5MCaCl2,含zui終濃度為125mM，用吸管輕輕吹打三次(不用攪拌器以防DNA袢結)，置室溫下10～30分鐘，待液體透明度降低，出現微濁蘭色時，即可用于轉染細胞。 

(6)取生長狀態良好處于半匯合階段的對數生長期細胞，在轉染前4小時，更換培養液(5ml/瓶)1次。 

(7)轉染：向每瓶中加DNA-磷酸鈣沉淀物0.5～1mL/瓶，置37℃作用4～6小時。 

(8)培養：棄去培養液，用15%甘油處理3分鐘，無血清培養漂洗1次，接近匯合時血清用量降至5%，培養2～3周。 

(9)檢測：逐日觀察，待出現“轉化灶”后，克隆分離，擴大培養建立轉化細胞株。