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使用 Skyline 創建單克隆抗體的 MRM 方法
閱讀：823 發布時間：2016-6-6
在抗體藥物的血藥濃度定量分析中，使用配體結合的傳統方法進行測定時，必須針對目標藥物制備具有高度特異性和親和性的檢測抗體，并且確立分析方法也需要耗費大量的時間和費用。而使用 LC/MS/MS 進行分析，由于不需要制備抗體，不僅大幅度縮短了分析方法的創建時間，還可以降低成本。
本文向您介紹使用Skyline 軟件和島津LCMS-8050/8060 創建MRM方法，對生物樣品中的單克隆抗體進行特異性檢測的分析示例。 免疫球蛋白的基本結構是由分子量約 23,000Da 的輕鏈和分子量 50,000～70,000Da 的重鏈構成，不同物種之間氨基酸序列保持一致稱為保守區域，各抗體分子中不同氨基酸序列部分被稱為可變區。在可變區中，規定抗原識別特異性的區域被稱為互補決定區（CDRs）。該區域在抗體分子間的氨基酸序列存在多樣性。免疫球蛋白中，重鏈和輕鏈分別含有 3 處 CDRs，為了將血液樣品中的抗體藥物等單克隆抗體與內源性抗體區分開定量，必須選擇性地檢測 CDRs。使用創建的分析方法測定經胰酶酶解的單克隆抗體。測定后數據文件將直接導入到 Skyline，并自動選擇高靈敏度的肽碎片和定量靈敏度高的離子對，由此篩選*定量分析條件。因此，島津LCMS-8050/8060 和 Skyline 軟件的組合使用，縮短定量分析方法的創建時間。
免疫球蛋白的結構和互補性決定區（CDRs）
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