詳細介紹
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調控;
⑤細胞分化及其調控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產品屬性:
英文名稱:PF-04217903
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發貨周期:1~3天
商品介紹:
PF-04217903是ATP競爭性c-Met抑制劑,IC50為4.8nM,對突變型Y1230C無活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:956905-27-4 純度:99.59% 分子量:372.38 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
孟氏假單胞菌Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠血纖蛋白原(Fbg)
哈茨木霉Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )
畢赤酵母Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )
產短桿菌Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠肌球蛋白(MYS)
不動桿菌Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠肌球蛋白(MYS)
雀斑蘑菇Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠結蛋白(Des)
分枝節桿菌Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠結蛋白(Des)
ppic9Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)
少根根霉Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)
加福尼亞鏈霉菌Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠GATA結合蛋白4(GATA4)
矮小傘枝霉Staphylococcus epidermidis大鼠GATA結合蛋白4(GATA4)
菠蘿泛菌Staphylococcus aureus subsp. aureus大鼠干擾誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)
凍土毛霉Staphylococcus equorum大鼠干擾誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)
林生毛霉Staphylococcus sp.大鼠上皮中性粒活化肽78(ENA-78/CXCL5)
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)Staphylococcus sp.大鼠上皮中性粒活化肽78(ENA-78/CXCL5)
克魯斯假絲酵母Staphylococcus sp.大鼠抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)
肺表面活性蛋白B抗體木質層孔菌總膽固(TC)比色法測試盒(單試劑COD-PAP法)
SEL1L抗體藍灰干酪菌脂質過氧化物(LPO)比色法測試盒
5-羥色胺轉運蛋白抗體蟬花蟲草甘油三酯(TG)比色法測試盒(單試劑GPO-PAP法)
沉默調節蛋白1抗體毛栓菌高密度脂蛋白膽固(HDL-C)比色法測試盒(雙試劑直接法)
c-Met抑制劑(PF-04217903)白靈菇 氧化槐果堿
鏈霉鏈霉 兔肌動蛋白
馬腺疫鏈球獸疫亞種 莪術二酮
冷溫木克酵母 朝藿定A1
釀酒酵母 硫酸魚精蛋白
弗氏檸檬酸桿 黃柏堿
藤黃微球 刀豆球蛋白A
釀酒酵母 京尼平
環狀芽胞桿 毛蕊異黃酮苷
大腸埃希氏 毛蕊異黃酮
脆弱鏈霉 牡荊葡萄糖苷
中生根瘤 沒食子兒茶
根瘤 芒柄花苷
小皮傘 豆甾
釀酒酵母 轉鐵蛋白