營養物質:包含氨基酸、維生素、葡萄糖等細胞生長所必需的基礎營養成分 。氨基酸是細胞合成蛋白質的原料;維生素參與細胞內眾多的代謝反應;葡萄糖則為細胞提供能量,這些物質共同滿足細胞生長、分裂和代謝的需求。
生長因子:如表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)等 。這些生長因子能夠與細胞表面的特異性受體結合,激活細胞內的信號傳導通路,促進細胞的增殖、分化和存活。例如,EGF 可刺激上皮細胞的生長和分化,在皮膚細胞培養等實驗中發揮重要作用。
結合蛋白:像轉鐵蛋白可結合并轉運鐵離子,為細胞提供鐵元素,同時防止鐵離子在溶液中產生自由基對細胞造成損傷;白蛋白能夠結合和運輸脂肪酸、激素等物質,維持細胞外環境的穩定 。
緩沖物質與 pH 調節劑:血清中的碳酸氫鹽、蛋白質等成分構成緩沖體系,可維持細胞培養液的 pH 穩定在 7.2 - 7.4 的適宜范圍,為細胞創造穩定的酸堿環境 。
高品質來源:血清取自澳大利亞特定區域的健康胎牛,該地區具有嚴格的動物健康監管體系,有效避免了瘋牛病(BSE)、口蹄疫等重大傳染病源的污染,從源頭上保證了血清的安全性和高品質 。
嚴格的質量控制:
微生物檢測:每一批次血清均經過嚴格的細菌、真菌、支原體和病毒檢測 。采用靈敏度高的檢測方法,如培養法、PCR 法等,確保血清無微生物污染,避免微生物對細胞培養造成干擾,甚至導致細胞死亡。
內毒素檢測:通過鱟試劑法(LAL 法)精確測定血清中的內毒素含量,每批血清內毒素水平低于 0.06 EU/mL,遠低于行業標準,減少內毒素對細胞生長和實驗結果的不良影響 。
細胞培養性能測試:使用多種不同類型的細胞系(如 HeLa 細胞、CHO 細胞等)對血清進行培養性能測試,評估細胞的生長速率、形態、存活率等指標,確保血清能夠為細胞提供良好的生長支持 。
穩定的批次間一致性:Thermo Fisher Scientific 采用標準化的生產流程和先進的質量控制體系,從血清采集、加工處理到最終檢測,每一個環節都嚴格把控 。通過對關鍵指標的嚴格監測和調控,保證不同批次的血清在成分和性能上具有高度一致性,科研人員在進行長期實驗或重復性實驗時,無需擔心因血清批次差異導致實驗結果不穩定的問題。
廣泛的適用性:適用于多種細胞類型的培養,無論是常規的細胞系,還是培養難度較高的原代細胞、胚胎干細胞等,都能提供良好的營養支持 。并且可與多種基礎培養基(如 DMEM、RPMI 1640 等)配合使用,滿足不同科研實驗的需求。
便捷的使用方式:產品以 500 mL 瓶裝形式提供,包裝規格符合實驗室常規使用需求。血清經過 γ 射線輻照處理,在不影響血清成分和性能的前提下,有效殺滅潛在的微生物,用戶無需進行額外的滅菌處理,可直接按照實驗需求進行稀釋和使用,操作便捷高效 。
血清檢查:收到血清后,立即檢查包裝是否完好,標簽信息是否清晰準確,包括產品名稱、貨號、規格、批號、有效期、儲存條件等 。將血清短暫離心(低速,如 1000 - 2000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),使附著在瓶蓋上的血清集中于瓶底,避免損失。同時,觀察血清外觀,正常情況下應為淺黃色或琥珀色、澄清且無沉淀或渾濁現象。若發現血清顏色異常、有明顯沉淀或異味,請勿使用,并及時聯系供應商處理。
培養基配制:根據所培養細胞的類型和實驗需求,選擇合適的基礎培養基 。在無菌環境下(如超凈工作臺),按照培養基說明書的要求,將基礎培養基粉末溶解于適量的超純水中,充分攪拌至溶解。然后,根據實驗設計,添加相應的添加劑(如谷氨酰胺、丙酮酸鈉等)。最后,按照一定比例(通常為 5% - 20%,具體比例需根據細胞類型和實驗要求確定)加入胎牛血清,用無菌的移液管或注射器將血清緩慢加入培養基中,輕輕搖勻,使血清與培養基充分混合 。配制好的培養基應盡快使用,如需保存,可置于 2 - 8℃冰箱中,但保存時間不宜過長,以免影響培養基的營養成分和性能。
細胞培養耗材準備:準備好無菌的細胞培養瓶、培養皿、移液管、槍頭、離心管等耗材 。確保所有耗材均經過嚴格的滅菌處理,可通過高壓蒸汽滅菌或購買預滅菌的一次性耗材。在使用前,檢查耗材的包裝是否完好,避免污染。
細胞復蘇(若為凍存細胞):從液氮罐中取出凍存的細胞,迅速放入 37℃水浴鍋中,輕輕搖晃,使細胞在 1 - 2 分鐘內快速解凍 。將解凍后的細胞懸液轉移至無菌離心管中,加入適量的含血清培養基,輕輕吹打混勻,然后以低速離心(如 800 - 1000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),棄去上清液,去除凍存保護劑。向離心管中加入適量的新鮮配制的含血清培養基,輕輕吹打,使細胞均勻分散,制成細胞懸液。將細胞懸液接種到細胞培養瓶或培養皿中,補充適量的培養基,使細胞密度達到合適范圍(根據細胞類型而定),然后將細胞培養瓶或培養皿放入細胞培養箱中,在適宜的溫度(一般為 37℃)、濕度(95%)和氣體環境(5% CO?)下培養 。
細胞傳代:當細胞生長達到 80% - 90% 匯合度時,需要進行傳代培養 。首先,棄去細胞培養瓶中的舊培養基,用無菌的 PBS 緩沖液輕輕沖洗細胞 1 - 2 次,去除殘留的培養基和代謝產物。然后,加入適量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液(根據培養瓶大小而定),輕輕搖晃培養瓶,使消化液均勻覆蓋細胞表面,在 37℃培養箱中孵育 1 - 3 分鐘,觀察細胞形態變化,當細胞變圓、部分細胞開始脫落時,立即加入含血清培養基終止消化(血清中的蛋白可中和胰蛋白酶活性) 。用無菌的移液管輕輕吹打細胞,使細胞脫離培養瓶壁,形成細胞懸液。將細胞懸液轉移至無菌離心管中,以低速離心(如 800 - 1000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),棄去上清液。根據實驗需求,將細胞重新接種到新的培養瓶或培養皿中,補充適量的含血清培養基,放入細胞培養箱中繼續培養 。
細胞凍存:當細胞生長狀態良好且數量足夠時,可進行細胞凍存,以備后續實驗使用 。首先,將細胞按照上述傳代步驟消化并制成細胞懸液,然后以低速離心(如 800 - 1000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),棄去上清液。向細胞沉淀中加入適量的細胞凍存液(通常為含 10% DMSO、90% 胎牛血清的培養基),輕輕吹打,使細胞均勻分散于凍存液中 。將細胞懸液分裝到無菌的凍存管中,每管體積一般為 1 - 2 mL,并做好標記(注明細胞名稱、凍存日期、批號等信息) 。將凍存管放入程序降溫盒中,置于 - 80℃冰箱中過夜,然后轉移至液氮罐中長期保存 。
血清保存:未開封的血清應儲存于 - 20℃冰箱中,可保存 5 年 。避免反復凍融,因為凍融過程會破壞血清中的蛋白結構,影響血清性能。若血清需多次使用,可在開封后將其分裝成小份(根據每次使用量確定分裝體積),密封好后放入 - 20℃冰箱冷凍保存,每次使用時取出一份,避免整瓶血清多次凍融 。已開封的血清,若短時間內使用(1 - 2 周),可儲存于 2 - 8℃冰箱;若長時間不用,仍需分裝后冷凍保存 。
廢棄物處理:實驗過程中產生的廢棄血清、培養基以及含有細胞的液體等,應按照實驗室生物安全和化學廢棄物處理規定進行分類處理 。對于含有生物活性物質的廢棄物,需進行高壓滅菌或化學消毒處理后,再進行丟棄,防止污染環境和傳播生物危害 。
血清儲存與解凍:
嚴格按照規定的溫度儲存血清,避免因儲存溫度不當導致血清變質。從 - 20℃冰箱中取出血清進行解凍時,應將血清置于 2 - 8℃冰箱中緩慢解凍,或采用水浴解凍的方式,但水浴溫度不得超過 37℃,且解凍過程中需不斷輕輕搖晃血清瓶,使血清均勻解凍 。避免將血清暴露在高溫環境下快速解凍,以免引起血清中蛋白沉淀和活性降低。
解凍后的血清應盡快使用,若不能立即使用,應儲存于 2 - 8℃冰箱中,并在一周內用完。若血清出現渾濁或沉淀,可通過低速離心(如 1000 - 2000 rpm,離心 5 - 10 分鐘)去除沉淀后使用,但需注意沉淀可能會影響血清的部分性能 。
細胞培養操作:
在細胞培養過程中,要嚴格遵守無菌操作規范,在超凈工作臺中進行所有操作,使用前需對超凈工作臺進行紫外消毒和風機預吹處理 。操作時應佩戴口罩、手套,避免交叉污染。每次使用完移液管、槍頭等耗材后,應及時丟棄,不得重復使用。
不同類型的細胞對血清的需求和耐受性不同,在進行新的細胞培養實驗前,建議進行預實驗,摸索最佳的血清添加比例和培養條件 。同時,注意觀察細胞的生長狀態,如細胞形態、增殖速度、存活率等,根據細胞狀態及時調整培養條件。
在更換培養基時,盡量減少細胞暴露在空氣中的時間,避免培養基干涸和細胞脫水。更換培養基的頻率應根據細胞的生長速度和代謝情況而定,一般為 1 - 2 天更換一次,以保證細胞能夠獲得充足的營養物質和良好的生長環境 。
安全防護:血清中可能含有未知的生物活性物質,雖然經過嚴格檢測,但在操作過程中仍需注意個人防護 。避免血清接觸皮膚和眼睛,如不慎接觸,應立即用大量清水沖洗,并根據情況就醫。實驗結束后,及時清洗實驗器材和操作臺,保持實驗室環境整潔安全 。
細胞生長緩慢或不生長:
原因:可能是血清添加比例不合適、血清質量不佳、培養基營養成分不足、細胞污染或培養條件不適宜等 。
解決方法:嘗試調整血清添加比例,增加或減少血清用量,觀察細胞生長情況;檢查血清的批號和質量檢測報告,確認血清是否合格,必要時更換新批次的血清;檢查培養基的配制是否正確,是否添加了足夠的營養物質;對細胞進行微生物污染檢測,如支原體檢測等,若發現污染,及時采取措施處理;優化培養條件,如調整溫度、CO?濃度、濕度等,確保細胞處于適宜的生長環境 。
細胞出現大量死亡:
原因:可能是血清中含有毒素或有害物質、細胞受到微生物污染、消化過度、培養環境突然改變等 。
解決方法:檢測血清中的內毒素含量和其他有害物質,若血清存在問題,更換新的血清;對細胞和培養環境進行微生物檢測,找出污染源并進行處理;優化細胞消化步驟,控制消化時間和消化液濃度,避免消化過度;在更換培養基、轉移細胞等操作時,盡量保持培養環境的穩定,減少對細胞的刺激 。
培養基出現渾濁:
原因:可能是培養基受到微生物污染、血清中存在雜質或沉淀、細胞代謝產物積累過多等 。
解決方法:對培養基進行微生物培養檢測,確定是否污染,若污染,丟棄污染的培養基,并對培養設備和環境進行消毒;將血清進行低速離心,去除沉淀后再使用;增加培養基更換頻率,及時清除細胞代謝產物,保持培養基的清潔 。
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