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淺析三種單細(xì)胞培養(yǎng)的異常原因分析
閱讀：333 發(fā)布時(shí)間：2022-10-21
單細(xì)胞培養(yǎng)真是一件特別心累的事，不知不覺間可能就會(huì)出現(xiàn)很多問題，細(xì)胞不長了、不貼壁了......實(shí)在讓人操碎了心。今天，美國Namocell公司就對(duì)單細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的異常進(jìn)行分析。
一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：
①胰蛋白酶消化過度；②支原體污染；③培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；④細(xì)胞老化；⑤接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。
解決方法：
①縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；②分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；③使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；④啟用新的保種細(xì)胞；⑤調(diào)節(jié)接種細(xì)胞濃度。
二、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：
①培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；②支原體污染；③蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解；④DNA污染。
解決方法：
①用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸；②細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；③分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體；④DNasel處理細(xì)胞。
三、細(xì)胞生長不好
可能原因：
細(xì)胞本身的狀態(tài)
①細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；②細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；③細(xì)胞傳代時(shí)間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；④胰酶消化時(shí)間過長或過短：時(shí)間過長，細(xì)胞死亡；時(shí)間過短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；⑤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速溶。