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有問有答|為您答疑解惑Lonza電轉系列二

2024-2-27  閱讀(229)

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Q:可以單獨訂購Nucleofector®試劑盒中的組分嗎?

A:Nucleofector®試劑盒僅作為完整的試劑盒提供,不單獨提供試劑盒中的任何組分。


Q:試劑盒中的Solution冷凍了,會有影響嗎?

A:只要Solution中沒有添加Supplement組分,就沒有影響,即使是幾個月的長期儲存也不會改變Solution的性能。但是,如果添加Supplement后進行了冷凍,檢查是否有沉淀物,如果存在沉淀物,需要進行測試,以排查是否影響性能。


Q:Nucleofector®試劑盒中包含的pmaxGFP對照載體適合穩定表達嗎?

您的pmaxGFP對照載體是否與Nucleofector®試劑盒一起提供,適合穩定表達?

A:不適合。該載體僅作為陽性對照使用,不能用于篩選,因為它不包含哺乳動物選擇標記。該載體表達的抗性基因是卡那霉素,只適合細菌篩選。


Q:有哪些方面可以優化,提升DNA轉染T細胞后的活率?

A:盡量將DNA量保持在較低水平(例如,每100 µL反應1µg質粒DNA),因為較高的DNA量可能會導致毒性,增加死亡率;使用高純度的DNA也很重要,例如使用Endofree™ 質粒試劑盒(Qiagen);另外A260:A280的比例應至少為1.8。


Q:在電轉實驗中,瞬時基因表達的最佳孵育時間是多少?

A:最佳孵育時間為2-6天。這取決于各種因素,如蛋白質在培養基中的穩定性,蛋白質的潛在毒性、細胞密度和質粒在細胞核中的穩定性。

可以在轉染后24、48、72和96小時取出等份樣品進行摸索,測定蛋白質表達。


Q:小鼠的年齡對小鼠T細胞轉染重要嗎?

A:我們建議使用6-12周的小鼠。從太年輕或太老的小鼠中分離的T細胞進行核電轉都可能會導致轉染效率和活率偏低。


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