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Q1:在使用溫度低于最適溫度37℃時,如何保證全能核酸酶的應用效果?
由于逐典全能核酸酶在0-45°C溫度范圍下都具有活力,全能核酸酶對核酸的消化效果取決于酶的添加量、消化溫度和反應時間,當反應溫度較低時,可以適當延長反應時間;不能依賴增加全能核酸酶添加量保證消化效果,避免添加量過大導致全能核酸酶殘留的問題。
Q2：消化體系中的什么物質會影響全能核酸酶的酶活和消化效果?
消化體系中若含有高濃度的鈉鹽、鉀鹽,超過200mM時會受到明顯抑制,其余高于100mM磷酸鹽,100mM硫酸銨等均會抑制酶活。特別是消化體系中如含有EDTA金屬離子絡合劑,級全能核酸酶所必需的Mg2+蝥合掉,會使全能核酸酶損失超過90%的酶活力,此時可通過增加Mg2+濃度使全能核酸酶活力得到恢復。
Q3:在病毒疫苗生產過程中使用了全能核酸酶,后續如何去除以保證疫苗符合核酸酶殘留標準?
可根據病毒疫苗的分子量選取超過全能核酸酶分子量2倍的切向流膜包,當然若目標產物分子量較大,選取的切向流膜包(推薦300kDa切向超濾膜包孔徑越大去除效果越好,病毒疫苗均為大分子,所以目標產物可以有效被截留,而全能核酸酶可以被除去;以濃縮病毒疫苗為例,超濾置換完成5個體積,全能核酸酶的清除率即可達到99.5%。
Q4:生物制品中全能核酸酶的殘留量是衡量生物制品質量的重要指標之一,如何判斷使用過程中最終產品的全能核酸酶殘留量?
全能核酸酶屬于重組蛋白表達產品,在生物制品中同樣不能有殘留,所以在生物制品生產過程中使用全能核酸酶去除核酸后,還需要對全能核酸酶進行清除,并且進行檢測,確保產品符合質量標準要求。逐典可提供基于ELISA研發的全能核酸酶殘留檢測試劑盒,檢測限可達到0.2ng/mL。
