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細胞死亡在生物體的發育和穩態維持中起著關鍵作用。細胞死亡可以是主動調節的程序性死亡，也可以由于不可控環境引發的細胞壞死。在程序性死亡的通路中，鐵死亡是一種脂質過氧化依賴性細胞死亡形式。在過去的十年中，鐵死亡已成為一個高度新興的領域，對各種疾病的發生和發展都有影響。目前，已經發現有多種類型藥物能夠誘導鐵死亡發生，比如IKE可通過抑制system xc-、引起谷胱甘肽耗竭、脂質過氧化并誘導鐵死亡。除了發現很多通過GXP4關鍵的信號分子通路的藥物外，也發現了GPX4非依賴性鐵死亡通路的藥物。雖然已經發現了許多鐵死亡調節途徑，轉錄和代謝過程在參與鐵死亡調節方面的具體機制還沒有得到解釋。
為了發現鐵死亡的新型細胞調節因子，研究人員篩選了3684個具有已知靶點和作用模式的小分子庫。在用篩選庫的化合物預處理 HT-1080 細胞后，IKE 誘導鐵質細胞死亡。評估細胞活力，每種達到高于閾值活力的化合物視為目標化合物。利用瑞孚迪（Revvity）高通量藥物篩選工具搭建的平臺，將HT1080細胞接種到CulturPlate 384微孔板中，Sciclone G3液體工作站進行細胞處理和藥物刺激，并利用EnVision 2104多標記酶標儀檢測CellTiter-Glo測定的發光信號來評價。
在這16種潛在的鐵死亡抑制劑中，有Turofexorate和 Fexaramine（法尼醇 X 受體激動劑），以及已知的鐵死亡抑制劑Ferrostatin-1。為了進一步驗證這些目標化合物。是否為鐵死亡抑制因子，用相同的實驗方案利用Envision進行了10個劑量反應分析，由于缺乏可重復的功效，又剔除了六種化合物。
為了驗證這些化合物是鐵死亡選擇性，對相關化合物進行了細胞凋亡和壞死性凋亡試驗。對于細胞凋亡測定，使用星形孢菌素誘導細胞死亡;壞死性凋亡細胞死亡是通過 TNF-α、SMAC模擬物LCL-16和泛半胱天冬酶抑制劑 Z-VAD-FMK的混合物誘導的。結果表明除ATT外，選擇的化合物都無法挽救經歷細胞凋亡或壞死性凋亡的細胞，表明它們對鐵細胞死亡的選擇性作用。我們還測試了選擇的鐵死亡抑制化合物對III類鐵死亡誘導劑FIN56的效果的影響。幾乎所有化合物都顯示出對FIN56誘導的鐵死亡的保護作用，化合物Turofexorate和fexaramine效果尤為顯著。這些方式都是以相關藥物誘導后，利用Envision檢測相關細胞活力。最后也用流式結果進行了驗證。
Turofexorate和Fexaramine是已知的FXR合成激動劑，FXR是一種核受體，可作為肝臟、腎臟和小腸中膽汁酸的傳感器。在RSL3和IKE處理的寬濃度范圍內，通過Turofexorate或Fexaramine激活FXR可挽救細胞免于鐵死亡的細胞。
同時，FXR與類視黃醇X受體 （RXR） 形成二聚體從而發揮作用。為了測試FXR-RXR二聚化是否是實現抗鐵死亡作用所必需的，我們用鐵死亡誘導劑RSL3或IKE處理HT-1080細胞，并添加Turofexorate或Fexaramine以挽救細胞的鐵死亡。此外，我們用RXR拮抗劑HX 531（RXRi）處理細胞。我們觀察到添加RXR拮抗劑后顯著劑量依賴性致敏，表明僅激活FXR不足以抑制鐵死亡細胞死亡，需要FXR-RXR二聚化協作。以抑制鐵死亡。
為了模擬更接近生理條件，在HT-1080微球體中誘導鐵死亡，并用Turofexorate或Fexaramine處理它們。RSL3誘導的鐵死亡影響了微球的形成。而與FXR激動劑的聯合處理導致完整的球狀體與DMSO或鐵抑素1 處理的對照相同。利用Operetta高內涵圖像分析測量球體寬度與長度之比的結果證實了鐵死亡誘導球體和藥物抑制鐵死亡球體之間的顯著差異。
后續為了驗證相關作用機制，也利用了Envision的光吸收，熒光，化學發光等模塊對相關藥物的抗氧化，穩定性等進行相關的檢測。
最后，分別利用離體原代小鼠肝細胞和誘導的多能干細胞（iPSCs）分化為功能性人肝細胞進一步驗證相關化合物鐵死亡的重要調控能力，分別利用酶標儀和高內涵進行相關指標的檢測。
總結
核受體FXR是一種有效的鐵死亡轉錄調節因子，通過上調許多鐵死亡抑制基因來抑制脂質過氧化和鐵死亡。
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本工作利用瑞孚迪的高通量篩選工具和分子細胞評價系統，詳細解釋了各種模型內與細胞死亡相關的多種機制。
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