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分析有機(jī)磷農(nóng)藥的實(shí)驗(yàn)方法-® LC-MS/MS液質(zhì)分析系統(tǒng)
閱讀：2461 發(fā)布時(shí)間：2019-12-22API 3200™ 或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質(zhì)分析系統(tǒng)色譜分離流動(dòng)相的制備：
1M甲酸銨溶液：稱取 63g甲酸銨，溶于1L HPLC級(jí)的水中。
流動(dòng)相A：在1L水 (HPLC級(jí)) 中加入5mL 1M 甲酸銨溶液。
流動(dòng)相B：在1L甲醇 (HPLC級(jí)) 中加入5mL 1M 甲酸銨溶液。
樣品制備（水果與蔬菜基質(zhì)）
基于Anastassiadies等人提出的方法[1]：
1. 稱量10g切碎的樣品；
2. 加入100µL 內(nèi)標(biāo)溶液(D5-莠去津 1µg/mL)；
3. 加入10mL乙腈，劇烈振搖；
4. 加入4g無水MgSO4和1g的NaCl；
5. 馬上渦旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成；
6. 振搖30s后，4300r/min離心5min；
7. 取出1mL初提液，轉(zhuǎn)移至含有150mg無水MgSO4的離心管中；
8. 混合，5200r/min 離心1min；
9. 取出500µL上清液，用水將稀釋到1mL，得到提取液濃度約為0.5g/mL。
基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3]：
1. 在5g或10g樣品中，加入水到10mL；
2. 加20mL甲醇，使用UltraTurrax 組織勻漿機(jī)勻漿2min ；
3. 有時(shí)需要過濾或離心；
4. 加入NaCl 溶液 (100mL水中含20 g NaCl )，每6mL加入NaCl溶液2mL ；
5. 用5mL樣品溶液浸泡ChemElut 柱；
6. 5min后，用16mL二氯甲烷洗脫；
7. 40℃揮發(fā)至干；
8. 用甲醇與水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL，水1mL) 重新溶解；
9. 用0.45µm濾膜過濾。
基于Lehotay et al.[4]提出的方法：
1. 使用Molinex 混合器或類似設(shè)備勻質(zhì)水果或蔬菜樣品；
2. 加入乙腈，(15.0± 0.05)g勻質(zhì)的樣品加乙腈15mL，超聲提取2min后，混旋5min；
3. 加入6g無水MgSO4和1.5g NaCl的混合物，劇烈振搖1min；
4. 3000 r/min 離心5 min；
5. 取5mL上層溶液，加入1.8g無水MgSO4 和 0.3g Bondesil C8吸附劑；
6. 振搖20s；
7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀，或類似設(shè)備揮發(fā)至干；
8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解樣品；
9. 12000r/min高速離心 2min；
10. 上清液轉(zhuǎn)入自動(dòng)進(jìn)樣器的進(jìn)樣瓶中備用。
樣品制備（蜂蜜、果汁、果酒）[5]
1. 預(yù)處理：
蜂蜜樣品，對無結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品將其攪拌均勻?qū)τ薪Y(jié)晶的樣品，在密閉情況下，置于不超過60 ℃的水浴中溫?zé)幔袷帲龢悠啡咳诨髷噭颍杆倮鋮s至室溫分出0.5 kg作為試樣，置于樣品瓶中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。果汁、果酒樣品，將取得的全部原始樣品倒入潔凈的搪瓷混樣桶內(nèi)，充分?jǐn)嚢韫鲃颍賹⒒靹驑悠?/span>分裝出兩份(每份500mL),密封，作為試樣，標(biāo)明標(biāo)記。
2. 提取：
稱取15 g試樣(精確至0.01 g)于250mL具塞三角瓶中，加入30mL水，于40℃振蕩水浴上，振蕩溶解15min。加入10mL丙酮，然后將瓶中內(nèi)容物移入50mL分液漏斗中。用40mL二氯甲烷分?jǐn)?shù)次洗滌三角瓶，并將洗液倒入分液漏斗中，小心排氣，用力振搖8次，靜置分層，將下層有機(jī)相通過裝有無水硫酸鈉的筒形漏斗，收集于200mL雞心瓶中。再先后加入5mL丙酮和40mL二氯甲烷于分液漏斗中，振搖1min，靜置、分層后收集。如此重復(fù)提取兩次，合并提取液，將提取液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1mL，待凈化。
3. 凈化：
在Envi-Carb柱中加入約2 cm高無水硫酸鈉，將該柱連接在氨基Sep-Pak柱頂部，并將串聯(lián)柱放入下接雞心瓶的固定架上。加樣前先用4mL乙睛+甲苯(3+1)預(yù)洗柱，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鈉的頂部時(shí)，迅速將樣品提取液轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再用2mL乙睛+甲苯(3+1)洗滌樣液瓶三次，并將洗液移入柱中。在串聯(lián)柱上加上50mL貯液器，用25mL乙睛 +甲苯(3+1)洗脫農(nóng)藥，合并于雞心瓶中，并在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL。對氨基甲酸醋類農(nóng)藥檢測，加入5mL甲醇進(jìn)行溶劑交換兩次，后定容1mL,混勻，用于液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測定。對于其他農(nóng)藥檢測，加入25mL正己烷進(jìn)行溶劑交換兩次，后使樣液體積約為1mL，加入40µL內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，用于測定
色譜分離條件：
Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。
色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50 mm×2 mm，粒徑 4µm。
流動(dòng)相：A相—H2O+5mM 甲酸銨；B相—甲醇+5mM 甲酸銨
MS/MS 檢測：
API 3200™ 或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質(zhì)分析系統(tǒng)；TurboIonSpray®離子源，負(fù)離子模式，MRM 掃描方式
