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復蘇

1.從液氨中取出細胞凍存管，快速將其置入 37°水浴中解凍直至凍存管中無結晶，75%的酒精擦拭凍存管外壁:

2.將凍存管中的細胞移至含 6m 培養基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min;

3.棄上清，沉淀用 6ml培養基重懸，接種 25cm2培養瓶，于 37°C，5%CO2 細胞培養箱中培養

傳代:

(1) 貼壁細胞:

1. 細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次。

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1m 至培養瓶中，倒置微下觀客，待細胞回縮變圓后加入 5m 培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，將懸濃移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min;

3. 棄上清，沉淀細胞用 1-2m 培養基重懸，按1:2 比例進行分瓶傳代，補加培養基后放入 37，5%C02 細胞培養箱中培養

   
   

(2) 懸浮細胞

待細胞達到1x10^6/ml左右可按照以下方法換液培養或傳代

方法1:收集細胞，1000rpm 離心 5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻，將細胞懸液按 1: 2到 1: 3的比例分到合培養基的新中.

方法2:豎立放置培養瓶，細胞沉淀后棄去上半量培養基，將細胞懸液按 1: 2 到 1: 3 的比例分到含培養基的新瓶中.

凍存:

1.離心收集細胞并進行計數(參考離心條件: 1000rpm，5 min)。移去離心管中的上清液

2.加入適量的無血清細胞凍存液(EK-Bioscience 貨號: S002) 于離心管中，調整細胞濃度至1~5x10cells/L。輕柔混，制成細胞凍存懸液

3將離心管中的細胞凍存懸液分裝于已標示的凍存管中:

4.直接將含細胞懸液的凍存管放入-80C冰箱，長期冷凍保存或轉入液.