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傳代方法概述

1.消化傳代：

        棄去培養基，PBS潤洗一次后加入適量胰酶晃勻（以蓋住細胞表面為宜），放入培養箱消化。細胞呈斑片狀時加入等體積新鮮全培養基終止消化。吹打細胞后轉移懸液至潔凈離心管，600g離心5分鐘。棄去上清，用新鮮培養基重懸細胞至培養瓶，補足培養液體積，移入培養箱培養。

2.直接傳代：

         用吸管吸取細胞懸液的1/2～1/4至另一瓶中；加入適量的新鮮培養基，補足培養液體積，培養箱繼續培養。

3.離心傳代：

         將細胞懸液轉移至離心管內，600 g 離心 5 min，棄去上清。使用新鮮的培養基重懸細胞至新的培養瓶，補足培養液體積，培養箱繼續培養。

細胞凍存注意事項

細胞凍存步驟：

使用上述傳代步驟至離心后，棄去培養基，用600μL~1mL凍存液重懸細胞后，轉移細胞至凍存管。

無血清凍存液可直接凍于-80，否則采取梯度降溫法凍存。

含血清凍存液成分：20％FBS、10％DMSO、70％1640培養液

細胞凍存需注意：

● 細胞數量過少可能導致復蘇困難，應至少有5*105。

● 凍存時應處于對數生長期，狀態不佳的細胞復蘇困難。

● 盡量采用梯度降溫并使用梯度降溫盒。

● 凍存的細胞不可直接移入液氮，應-80凍存超過6小時后再液氮凍存。

● 凍存和復蘇的時間間隔不宜過短，不可小于三天。