調整好氮氣鋼瓶所需壓力（鋼瓶上減壓閥的輸出壓力），一般為0.1左右。打開控制面板上的F2開關，同時打開真空泵開關，讓其抽走過取樣室的空氣。氮氣充入操作室內，以手套向外伸直為止（不能過多充入，小心手套爆裂。），此時應立即關閉F2開關。然后打開F3與F4的開關，使操作室內的氣過渡到過道室，直到手套向內伸直為止，為防止手套爆裂，此時應馬上關閉F3與F4的開關，這樣氮氣的一次置換完成了，重復以上方法，做5到6次，做完后，整個氮氣的置換就完成了，關閉減壓閥和鋼瓶總閥。
混合氣體的置換方法：調整好混合氣體鋼瓶所需壓力（鋼瓶上減壓閥的輸出壓力），一般為0.1左右。打開控制面板上的F3開關，同時打開真空泵開關，讓其抽走取樣室內的空氣。混合氣充入操作室內，以手套向外伸直為止（不能過多充入，為防止手套爆裂。），此時應立即關閉F3開關，然后打開F1和F2開關，使操作室內的氣過渡到取樣室內，直到手套向內伸直為止，為防止手套爆裂此時應立即關閉F1與F2的開關，這樣混合氣的一次置換完成了，重復以上方法，做5到6次，做完后，整個氣體的置換就完成了，這時操作室內就形成了厭氧環境，并關閉真空泵開關。打開F5，并調節面板上的穩流閥和流量計，使流量計的流量為10ml/min。直至全部實驗結束，關閉減壓閥和混合氣總閥。
真正達到你所需的厭氧狀態，還要用鈀粒分篩來吸收操作室內的剩余氧分子，最后用指示條（指示條的藍色上加一滴純水）來測量操作室是否還有氧，指示條變色表明已經是厭氧環境了，此時就可以進行厭氧菌的培養了。
實驗中，如果忘記了做實驗的工具或別的東西，需要拿到操作室里去，首先打開取樣室的外門，把所需的東西放入取樣室內，關緊外門，打開真空泵開關，再讓其抽取樣室內的空氣。一般壓力為-0.06到-0.08左右，到了后關閉真空泵開關，打開F1開關，向過道室內充入氮氣，使壓力表上的指示針回落到零位，關閉F1開關，再打開真空泵開關，再抽真空，到壓力后，關閉真空泵開關。打開F4開關，向取樣室內充混合氣直止壓力表指針回落到零位，關閉F4開關，打開取樣室內門，把東西挪到操作室內后，關閉內門，如果從操作室向外拿就直接打開取樣室門（置換好氣體后沒有打開過取樣室的外門的前提下），把東西放入取樣室后關閉內門，再打開外門就可把東西拿出來了。取樣室不是在置換氣體狀態中壓力應為零.
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