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超液相色譜串聯質譜法同時測定鼠尿中17種人生皂苷
閱讀：1191 發布時間：2015-1-13
人參皂苷是人參屬藥材的活性成分，目前已經分離出多達30余種不同的人參皂苷，他們含有兩個主要的苷元：原人參三醇（PPT）或原人參二醇（PPD）。人或動物攝入后，在血漿和尿液中可檢測到它們的存在。由于人參皂苷的生物活性可能是多種皂苷在體內協同作用的結果，因此，同時分離和測定多種人參皂苷對于研究人參皂苷的藥理和毒理學機理具有重要意義。
檢測時可以對雄性大鼠進行人參皂苷喂養實驗。將采集的新鮮尿樣樣品離心，去除固體雜質，上清液經固相萃取后，經過超高液相色譜串聯質譜測定。內標法定量，方法的檢出限為2~18ng/mL，回收率74.9%~94.5%，皂苷種類不同回收率不同。
使用儀器：超液相色譜儀（配有串聯四級桿質譜檢測器）；液體均勻器；離心機；氮吹儀；固相萃取小柱。
測定方法：購買8只8周的雄性大鼠，進行1~13d人參皂苷喂養實驗。每日飼喂量是100mg/kg。在第0d取空白尿樣，在第7，10,13d取待測尿樣。
將采集的新鮮尿樣在室溫下以3500r/min迅速離心10min，以除去固體污染物，上清液于—20℃保存。
用1mL甲醇和2mL水平衡固相萃取柱，以后在真空下將700μL尿液上清液和50μL內標液過柱，用水淋洗小柱5次并吹干。用甲醇水溶液洗脫柱上的人參皂苷，洗脫2次，每次0.2mL，合并洗脫液。在4℃、20000×g離心10min，用超液相色譜串聯質譜分析。