膜蛋白參與許多生物過程,例如細(xì)胞內(nèi)部和外部環(huán)境之間的信號傳導(dǎo),離子和分子的運(yùn)輸以及化學(xué)反應(yīng)的催化,它們也是60%以上藥物的靶標(biāo)。確定配體或藥物分子與膜蛋白的結(jié)合對于理解生物過程和發(fā)現(xiàn)新藥至關(guān)重要。糖蛋白是在細(xì)胞識別和通訊中起重要作用的膜蛋白。 凝集素(一種與特定糖結(jié)構(gòu)結(jié)合的蛋白質(zhì))和糖蛋白之間的結(jié)合活性提供了有關(guān)糖基在細(xì)胞表面的性質(zhì)、分布和生物學(xué)作用的信息。使用無標(biāo)記的SPR 顯微鏡在 CHO、A375 和 H4 細(xì)胞上研究了芽凝集素 (WGA) 的相互作用。將細(xì)胞在傳感器表面上孵育并在室溫下用4%PFA固定。使用不同的濃度WGA與細(xì)胞膜蛋白重復(fù)結(jié)合動(dòng)力學(xué)。通過這些步驟,獲得了不同濃度WGA的傳感器圖,并用動(dòng)力學(xué)模型擬合以確定動(dòng)力學(xué)(ka和 kd) 和平衡常數(shù) (KD).
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