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293細胞（HEK293細胞）是一種廣泛應用于分子生物學、基因工程和病毒載體研究的人胚腎細胞系。其培養方法主要包括以下幾個步驟：

細胞復蘇

將凍存管中的293細胞在37℃水浴中解凍，輕輕搖動使其全融化。

將解凍后的細胞懸液加入預熱的培養基中，輕輕吹打混勻后離心。

棄去上清液，加入適量培養基，將細胞懸液重懸并轉移到培養瓶或培養板中，放置于37℃、5% CO2的培養箱中過夜培養。

傳代培養

當細胞生長至60%-70%融合度時，進行傳代培養。

使用胰酶消化液（如0.25%胰酶和EDTA）處理細胞，消化時間約為3-5分鐘，直到大部分細胞脫落。

輕輕吹打細胞懸液，使其均勻分散，然后終止消化。

將細胞懸液轉移到新的培養瓶或培養板中，加入新鮮的培養基，繼續培養。

培養條件

培養基通常為DMEM或RPMI-1640，含有10%胎牛血清（FBS）、青霉素-鏈霉素等成分

細胞培養環境為37℃、5% CO2、飽和濕度。

對于懸浮培養，可選擇無血清培養基，如CelCulSF™ 293 Cell Culture Medium。

凍存

細胞達到對數生長期后，收集細胞并離心去除培養基。

將細胞重懸于凍存液（如90% DMSO和10%胎牛血清）中，分裝后置于液氮中保存。

注意事項

傳代時避免過度消化，以免影響細胞活性。

每次傳代后需檢查細胞狀態，如發現異常應及時調整培養條件。

在轉染實驗中，需注意磷酸鈣轉染時避免細胞過度貼壁導致脫落。

特殊培養方式

可以采用貼壁培養、微載體培養或無血清懸浮培養等方式進行大規模培養。

懸浮培養時需定期更換培養基以維持細胞生長。

應用

293細胞常用于腺病毒載體的構建、重組蛋白的生產以及基因功能研究

總結：293細胞的培養需要嚴格控制培養條件，包括溫度、CO2濃度和培養基成分等。同時，在傳代、凍存和轉染過程中需注意操作細節，以確保細胞的健康生長和實驗的成功進行。