鬼筆環肽(Phalloidin)是一種從毒蘑菇中提取的環狀多肽,由七個氨基酸殘基組成。其結構使其能夠特異性地結合細胞骨架中的肌動蛋白(Actin) filament。當鬼筆環肽進入細胞后,它會與肌動蛋白聚合體上的特定位點緊密結合,這種結合極為穩定,甚至能在細胞固定和 permeabilization過程中保持結合狀態。
這種結合特性在細胞分析中有雙重意義:一方面,它能穩定細胞骨架結構,使研究人員能在固定后的細胞中觀察到完整的細胞骨架形態;另一方面,通過標記鬼筆環肽,可以實現對細胞內肌動蛋白分布的可視化。研究顯示,鬼筆環肽與肌動蛋白的結合常數高達10? M?1,這種高親和力確保了其在細胞染色中的高效性和特異性。
Phalloidin是鬼筆環肽的另一種常見名稱,盡管在文獻中有時會將兩者視為同義詞,但實際上Phalloidin特指鬼筆環肽中的一個特定活性成分。在細胞分析領域,Phalloidin主要通過以下機制發揮作用:
肌動蛋白聚合調控:Phalloidin能夠促進肌動蛋白單體(G-Actin)向聚合體(F-Actin)的轉化,加速細胞骨架的組裝過程。這種聚合促進作用在研究細胞運動、吞噬作用和形態變化時極為重要。
結構穩定作用:一旦與F-Actin結合,Phalloidin會顯著增強肌動蛋白 filament的穩定性,防止其在細胞處理過程中解聚。這種穩定性對于需要長期觀察細胞骨架結構的研究(如延時成像)至關重要。
熒光標記基礎:天然Phalloidin本身不具備熒光特性,但其高親和力的結合特性使其成為理想的熒光標記載體。通過化學偶聯技術,可以將各種熒光基團連接到Phalloidin分子上,從而實現對細胞骨架的熒光標記。
AbFluor™ 594-Phalloidin(產品編號BMD00084)是經過特殊修飾的鬼筆環肽衍生物,其工作原理建立在三個關鍵技術基礎上:
熒光標記技術:該產品采用先進的熒光基團連接技術,將AbFluor™ 594熒光基團共價連接到Phalloidin分子上。AbFluor™ 594具有出色的光穩定性和明亮的紅色熒光(激發波長590nm,發射波長615nm),使其在多色熒光成像實驗中具有顯著優勢。
高親和力結合機制:盡管經過熒光標記,BMD00084仍保留了Phalloidin對F-Actin的高親和力結合特性。研究表明,其結合常數與未標記Phalloidin相當,確保了染色的特異性和靈敏度。
細胞穿透與均勻染色:該產品經過特殊處理,能夠有效穿透細胞膜并均勻分布在整個細胞內。其染色過程通常在室溫下進行15-30分鐘,即可獲得清晰的細胞骨架圖像。這種快速染色特性使其在高通量篩選實驗中表現優異。
在一項關于癌癥細胞侵襲機制的研究中,研究人員使用BMD00084對乳腺癌細胞系的細胞骨架進行染色。通過共聚焦顯微鏡觀察發現,侵襲性較強的癌細胞表現出明顯的肌動蛋白纖維重組現象,這些纖維在細胞前緣形成突出的偽足結構。BMD00084的熒光信號清晰地勾勒出這些動態變化,證明了其在捕捉細胞骨架瞬時變化方面的有效性。
另一項研究中,科學家們利用BMD00084與綠色熒光標記的細胞膜染料進行共染色實驗。結果顯示,細胞在遷移過程中,肌動蛋白骨架與細胞膜之間存在密切的相互作用。這種多色熒光成像應用驗證了BMD00084在復雜細胞環境中的兼容性和可靠性。
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