液相色譜法測(cè)定牡丹皮中丹皮酚的含量

牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，味苦、性微寒，具有清熱涼血，活血散瘀的功能。丹皮酚是丹皮中重要的有效成分，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血壓等多種功效。目前采用液相色譜測(cè)定丹皮酚的含量是丹皮及其制劑質(zhì)量的控制指標(biāo)。本文采用天津蘭博的液相色譜系統(tǒng)，建立了檢測(cè)丹皮中丹皮酚的含量的方法，結(jié)果顯示方法簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠。

1 測(cè)試條件

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS1000自動(dòng)進(jìn)樣器，Lablliance Series 高壓泵、DAD檢測(cè)器和Lablliance色譜工作站組成，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱。

GC6500美國(guó)蘭博液相色譜儀

1.2試劑和樣品

丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），甲醇（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑為分析純，丹皮樣品購(gòu)自當(dāng)?shù)厮幍辏瑏?lái)源安徽銅陵。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品4 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇醇溶解并定容至刻度，搖勻備用，配成40 ug/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。測(cè)定前用流動(dòng)相稀釋成所用濃度。

1.4供試品溶液的制備

取本品粗粉約0. 5 g，精密稱定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇 25 mL，稱定重量，超聲提取30 min, 放冷, 加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液2 mL，置25 mL量瓶中, 加甲醇稀釋到刻度, 搖勻。

1.5色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流動(dòng)相：50%甲醇-水溶液（v/v）

柱溫：室溫；

流速：1.0 mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：274 nm；

2測(cè)試結(jié)果：

2.1 色譜系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試

按1.5的測(cè)試條件對(duì)丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，所得色譜圖如圖1 所示，以丹皮酚計(jì)算理論塔板數(shù)不小于3000。

2.2線性關(guān)系、方法檢出限考察

精密吸取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10 mL置10 mL 量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，各進(jìn)樣 20 uL，測(cè)定峰面積積分值。以對(duì)照品溶液濃度(mg/L)對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，結(jié)果表明丹皮酚峰面積積分值與濃度C呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為： Y = 82. 64 + 41362. 8C，R= 0. 9998，線性范圍為 0. 36～2.2 ug。

2.3丹皮酚穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液, 于配制后的 0、2、4、8、12、20、24和 48 h測(cè)定, 結(jié)果表明在 48 h內(nèi)穩(wěn)定, 峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD )為 0.98% 。

2.4丹皮酚精密度和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取丹皮供試品溶液10 uL重復(fù)進(jìn)樣8次，根據(jù)所得面積值計(jì)算， RSD =0. 60%。取丹皮藥材6份，平行進(jìn)行提取測(cè)定，求得丹皮酚含量的 RSD 為1. 82%。

2.5丹皮酚回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取 8份丹皮藥材樣品0. 5 g，分別加入相當(dāng)于含丹皮酚0. 75 mg、0. 25 mg的對(duì)照品溶液各4份，按1.4方法提取后進(jìn)樣分析，測(cè)得丹皮酚的回收率分別為 97. 96，98. 21，RSD 為1. 84、1. 56。進(jìn)行加樣法測(cè)定回收率, 平均回收率99. 21% , RSD= 1.60%。

3結(jié)論

采用液相色譜對(duì)丹皮酚進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示本方法方便、準(zhǔn)確、精密度高，重現(xiàn)性好，可以用來(lái)對(duì)于藥材適量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。