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采用柱后TFA-Fix 技術降低流動相中TFA對多肽質譜信號抑制作用

閱讀:655      發布時間:2018-05-29
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引言 在反相色譜分離多肽和蛋白質的實驗中,使用 (TFA) 作為離子對試劑是常見的手段,流動相中的(TFA)通過與疏水鍵合相和殘留的極性表面以多種模式相互作 用,來改善峰形、克服峰展寬和拖尾問題。同時反相色譜 與電噴霧質譜聯用已成為多肽和蛋白質的分子量測定和結 構分析的重要工具,但是含有(TFA)的流動相對質譜離 子的產生具有抑制作用,一定程度上降低了液質聯用技術 的靈敏性和分析可靠性。

目前常用的方法是降低流動相中 TFA 濃度, 達到降低這種 抑制作用,但是也會造成色譜分析質量的降低;而如果用 甲酸代替 TFA, 會造成色譜分離柱效降低,達不到理想的分 離效果。

本文采用雙三元液相色譜系統 (DGLC),充分利用雙泵的優 勢,將兩個泵分別作為流動相的輸液泵和柱后溶液的傳輸 泵,實現與質譜的全自動連接。采用 TFA-Fix 技術或者抑制 器技術降低流動相中 TFA 對 MS 的離子產生的抑制作用, 尤其是柱后抑制器技術大大提高了多肽樣品在質譜上的靈 敏度。

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