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針對lgG1抗體中N糖型的定性和定量——LC-FLD、LC-MS/MS不同分析方法的比較

閱讀：580 發布時間：2020-06-29

重組單克隆抗體( mAbs)已是日益廣泛使用的治療性蛋白質藥物，其中以IgG1和IgG2類型較為常見。其恒定區的N糖基化在不同的細胞系、克隆和生產條件之間的差異很大，且具有高度的異質性，聚糖結構或不同聚糖類型含量的改變通常影響抗體生物學活性、穩定性、免疫原性和半衰期，是許多治療性抗體的關鍵質量屬性，對控制產品一致性至關重要。

分析不同寡糖結構和含量的傳統策略為通過PNGase F糖苷內切酶將寡糖從抗體中釋放，對糖鏈進行標記、熒光對其進行定性和定量，然而其局限于需要寡糖標準品，且當抗體中含有多個N糖基化位點時，不能區分位點的異質性，而基于高分辨質譜對寡糖及糖肽的定性和定量則能夠解決上述問題，但定量時需考慮不同離子的離子化效率不同。本文采用LC-MS/MS法對原研lgG1抗體藥物的N糖肽及游離寡糖進行鑒定和相對定量，同時與經典方法L _C-FL D進行定量結果的比較。