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背景介紹： 萬古霉素(Vancomycin，VCM) 是支鏈的三環糖基化非核糖體 肽，可直接作用于細菌細胞壁前體羧基末端的D-丙氨酰-D-丙氨 酸，抑制細胞壁蛋白的合成，革蘭陽性菌對萬古霉素敏感，因 此對VCM對該類細菌有較強的殺菌作用，所以，它是目前治療 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus，MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)等所致 重癥感染的抗生素，在臨床治療學上占據重要地位。臨床 上常常進行靜脈給藥全身應用萬古霉素以治療敏感菌感染，但 這種用藥方式經常損害人體肝臟、腎臟等重要組織器官，造 成比較嚴重的副反應。傳統上，萬古霉素被用作“后一線藥 物”，用來治療所有抗生素均無效的革蘭氏陽性菌的嚴重感 染。因此，為個體化給藥方案提供理論依據，避免給危重病人 帶來更加嚴重的副反應，實現萬古霉素的準確定量的意義重 大。

由于每個個體之間年齡、性別、健康狀況等都存在差異性，會 導致患者體內萬古霉素的血藥濃度的個體間偏差較大。而通過 治療藥物監測 (Therapeutic drug monitoring, TDM)可以幫助醫生 制定個體化用藥方案。給藥時，劑量將依據患者的血液濃度作 調整，使患者在不良反應風險較小的條件下獲得較好的療效。 給藥期間定時監測血藥濃度有助于降低不良反應發生的風險。 當患者病情得到較好的控制而血藥濃度過高，可以根據醫囑相 應地減低劑量，降低不良反應風險；若患者病情不能得到控 制，血藥濃度的結果還可以幫助醫生調整用藥劑量，以獲得更 好的療效。

 方法介紹及優勢 本文在新款智能Vanquish Core雙三元液相系統上開發OnlineSPE自動化樣品前處理的液相色譜分析方法，用于監測血 清中萬古霉素含量。該方法具有靈敏度高、重現性好、耗時短 等特點。從萬古霉素的線性范圍、重復性測試，到血清的加標 測試，對血清中的萬古霉素進行了完整的定量分析，系統地為 臨床個性化、更合理、更安全地用藥提供一定的依 據，提升臨床的藥物依從性，給患者提供更好的療效。

 實驗方法 1. 實驗部分 1.1 儀器與試劑 1.1.1 Thermo Vanquish Core 高效液相色譜系統 Vanquish Core DGLC高效液相色譜系統包括帶在線脫氣單元的 雙三元梯度泵、等度泵、自動進樣器（1000 µL 進樣環）、柱 溫箱 (含一個Viper Only 2p-6p切換閥) 和DAD檢測器（含13 µL流 通池；CDS變色龍色譜軟件版本為7.2.10。 1.1.2 試劑及標準品 乙腈、甲醇 (色譜級，Fisher公司)，去離子水(18.2MΩ，Millipore 純水機)，磷酸（分析純AR，國藥集團），鹽酸萬古霉素 ( 96.5%，DR. EHRENSTORFER) 1.1.3 樣品溶液制備 標樣的配制：用水溶解，配置萬古霉素儲備液100 mg/L，并用 50%甲醇水稀釋至需要濃度的溶液。加標血清制備：用移液槍準確吸取1000 µL空白血清，分別加入 適量萬古霉素稀釋標準溶液，配置成需要濃度的加標血樣。 血液樣品的配制：準確吸取1.00 mL血清于10 mL離心管中，加 入3 mL沉淀試劑，渦旋混合20 s，12000 r/min下離心10 min， 取上層清液過0.22 µm水相膜加入進樣小瓶，等待進樣。

 1.2.2 色譜分析條件 色譜柱：Thermo Hypersil GOLDTM aQ色譜柱（150 mm * 4.6 mm，5 μm） 萃取柱：SPE TDM柱 (重慶大學藥學院合作實驗室提供) 柱溫：30 ℃； DAD ：檢測波長210 nm DGLC左泵（分析泵）流動相A：乙腈，流動相B： 1000 mL水 溶液(50 μL磷酸) 

 精密吸取1mL空白血清，分別加入適量萬古霉素稀釋標準溶，配置成不同濃度的標準溶液，標準品濃度分別為0.502、1.004、 2.008、5.020、10.04 和 20.08 μg/mL，進樣體積為200 μL。圖5所示為標準曲線，線性回歸方程為 Y=0.8161X-0.1251 ，R2=0.9991，表 明在0.502 - 20.08 μg/mL 濃度范圍內線性良好，同時該方法空白血清樣品在萬古霉素出峰位置（5.41 min）無基質干擾。由于萬 古霉素-甲醇水（1:1）標準溶液和血清樣品溶劑差異較大，建議標準品的加入體積不超過血清樣品體積的5%。

結論 本文采用Vanquish Core DGLC自動化樣品前處理的Online-SPE 方法，借助HPLC-DAD分析，開發了監測血清中抗生素類 藥物萬古霉素的方法。該方法具有靈敏度高、重現性好和耗時 短等特點。結果顯示，此方法測定萬古霉素的線性范圍寬，在 0.502-20.08 ug/ml范圍內保持線性良好，保留時間 RSD＜0.1% ，峰面積 RSD＜1.5%，結果表明該方法重復性好，準確度高， 且回收率在90.0%-115.0%，可用于定量分析血清中的萬古霉 素，系統地為臨床個性化、更精準、更合理、更安全地用藥提 供可靠依據。