蛋白酶體是真核細胞內的一種大型多催化蛋白酶復合體。26S蛋白酶體是一個包含60個亞基的顆粒,由一個20S核心和一個或兩個19S調節顆粒組成。催化核心,即20S蛋白酶體(700 kDa),由兩組七個β亞基和兩組七個α亞基組成。β1、β2和β5亞基分別具有半胱氨酸酶樣、胰蛋白酶樣和胰凝乳蛋白酶樣的肽解活性。在真核細胞中,20S蛋白酶體的組裝需要至少五種組裝分子伴侶的協助。蛋白酶體對細胞蛋白的降解始于多肽鏈上連接泛素鏈。泛素標簽被19S顆粒的“蓋子”識別并結合,隨后泛素鏈被解離,蛋白質展開并隨后轉運至20S蛋白酶體中。
蛋白酶體活性在細胞的主要事件中發揮著關鍵作用,包括蛋白質質量控制、基因轉錄調控、DNA損傷響應、衰老、氧化應激和信號轉導。在過去二十年中,已經鑒定出許多針對特定活性位點的選擇性蛋白酶體抑制劑。值得注意的是,硼替佐米(Bortezomib)和卡非佐米(Carfilzomib)是經FDA批準用于治療多發性骨髓瘤的蛋白酶體抑制劑藥物。目前,還有幾種新的蛋白酶體抑制劑正在試驗中,用于治療多發性骨髓瘤和其他惡性腫瘤。
這種純化的20S蛋白酶體制劑可用于體外降解肽段底物和展開的蛋白質。蛋白酶體的胰凝乳蛋白酶樣活性可通過使用Suc-LLVY-AMC(產品編號:PS500)輕松測量。被活性酶切割后,它會產生一種具有460 nm發射波長的高熒光產物。
艾美捷[干冰]20S蛋白酶體:
貨號:PS-0020-0050
物種:人類
來源:紅細胞
標簽:無
分子量:700 kDa
數量:50 ug
濃度:1 mg/mL
配方:20 mM Tris-HCl,pH 7.2,10%甘油,150 mM KCl,1 mM β-巰基乙醇
儲存:-80°C,避免反復凍融。
[干冰]20S蛋白酶體圖片:
左圖:20S蛋白酶體(45 µg/ml)的胰凝乳蛋白酶樣活性是通過在20 mM HEPES(pH 7.5)、0.5 mM EDTA、0.05% Triton X的溶液中,使用100 uM Suc-LLVY-AMC進行測量的,實驗中加入了或未加入0.035% SDS。
右圖:20S蛋白酶體(18 µg/ml)的胰凝乳蛋白酶樣活性是通過在20 mM HEPES(pH 7.5)、0.5 mM EDTA、0.05% Triton X的溶液中,使用100 uM Suc-LLVY-AMC進行測量的,實驗中加入了或未加入0.5 mM MG132(產品編號:SI9710)。
文獻參考:
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2. Golgberg AL (2012) JCB Development of proteasome inhibitors as research tools and cancer drugs. 199(4),583-588.
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5. Kisselev AF, et al. (2012) Proteasome inhibitors: an expanding army attacking a unique target. Chemistry &Biology, 19(1):99-115.
6. Kim Y-C and DeMartino GN (2011) C termini of proteasomal ATPases play nonequivalent roles in cellular assembly of mammalian 26 S proteasome. JBC 286(30): 26652–26666.
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