前 言

2025年版《中國藥典》將于10月1日起正式實施，在生物制品質量控制及病毒安全性評價方面做出了關鍵修訂，對推動生物醫藥行業發展十分重要。

在保持與國際接軌的同時，基于WHO、ICH等國際相關指導原則的變化趨勢，結合我國生物制品發展的需求，“生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及質量控制”部分被拆分為兩部分：“生物制品生產用動物細胞基質制備及質量控制（通則0234）”和“生物制品檢定用動物細胞質量控制（通則0235）”。

通則0234首-次新增昆蟲細胞的適用范圍，加入風險評估策略，優化細胞庫檢定項目，并在傳統檢測方法基礎上新增病毒核酸擴增方法或NGS（下一代測序或高通量測序）法作為補充或替代的內容，提升檢測的科學性、合理性和安全性。

通則0235在2020年版版藥典內容基礎上，新增了針對特定基因修飾細胞的具體檢測要求，涵蓋構建過程、特征鑒別、使用代次內穩定性等方面，滿足產業發展需要。

為更好的遵循監管要求進行藥品的研制、生產和質量管理，義翹神州將與大家一起對2025年版《中國藥典》“通則0234”和“通則0235”的變化進行詳細解讀。今天我們先解讀“細胞檢定”項目要求的變化。

注：以下內容中，綠色字體表示更改內容，紅色字體為新增內容。

一、細胞檢定項目要求的總體變化與解讀

1細胞檢定

2025年版藥典：細胞檢定主要包括以下幾個方面：細胞鑒別、外源因子和內源因子的檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。必要時還須進行細胞生長特性、細胞染色體檢查、細胞均一性及穩定性檢查。這些檢測內容對于MCB細胞和WCB細胞、生產終末細胞（EOPC）或生產限定代次細胞均適用。

修改說明：增加生產限定代次細胞可代替生產終末細胞（EOPC）

2細胞檢定項目要求

2025年版藥典：應對細胞來源、培養及建庫過程進行風險評估，并制定檢定策略。通常應至少對MCB細胞及EOPC細胞或生產限定代次細胞進行一次全面檢定， WCB細胞進行部分檢定。如對MCB細胞不能進行全面檢定，可對首-個WCB細胞進行全面檢定，后續建立的WCB細胞可通過評估后進行部分檢定。當生產工藝發生變更時，需經評估，必要時應重新對EOPC細胞或生產限定代次細胞進行檢測。細胞檢定的基本要求見表1。

修改說明：

1. 增加需根據風險評估制定檢定策略；

2. 增加生產限定代次細胞可替代EOPC進行全檢；

3. 增加首-個WCB全檢可替代MCB

4. 增加生產工藝變更時，可經評估是否重新檢測。

解讀：

· 檢定策略制定中引入風險評估的理念

· 明確了主庫、工作庫的檢定策略

· 某些細胞治療產品（干細胞、CAR-T細胞等）MCB數量是有限的，進行WCB全檢對樣品量具有挑戰性，可首-個WCB全檢替代MCB

· 不是所有的工藝變更都要復檢EOPC，需要經過評估后確定是否需要復檢

表1：細胞檢定的基本要求

注：“+”為必檢項目，“-”為非強制檢定項目，（+）表示需要根據細胞特性、傳代歷史、培養過程等情況評估后進行的檢定項目。

a. EOPC，是指達到或超過生產末期時收獲的細胞，盡可能取按生產規模制備的生產末期細胞。

b. 對分枝桿菌易感的細胞進行該項檢查。

c. 根據風險評估結果確定是否進行體內實驗，如在建庫或細胞培養過程中存在外源因子引入的風險，可進行體內實驗或用經驗證的NGS法替代。

d. 從MCB或WCB復蘇細胞，擴增至或超過生產用細胞齡限制代次作為待檢樣本。

修改說明：

1. 增加生產限定代次細胞（LIVCA）可替代EOPC

2. 更改EOPC/LIVCA細胞鑒別為必檢項 

3. 新增螺原體檢查 

4. 刪除細胞形態觀察及血吸附試驗

5. 更改MCB及EOPC/LIVCA動物和雞胚體內接種法為可選項，且可用經驗證的NGS方法替代 

6. 刪除染色體檢查，染色體檢查作為新建二倍體細胞的檢測項目，不放在細胞基質總的檢定要求

7. 更改EOPC/LIVCA成瘤性檢查為可選項 

8. 增加成瘤性/致瘤性檢查待檢樣本要求

9. 增加穩定性檢查，為可選項（原為重組細胞的特殊要求，現調整至此處）

二、細胞檢定項目及方法的變化與解讀

1細胞鑒別

2025年版藥典：細胞庫（MCB和WCB）和生產終末細胞或生產限定代次細胞應進行鑒別試驗，以確認所用細胞正確，且無其他細胞的交叉污染。重組細胞系的專屬特性的鑒別，還應通過檢測目的蛋白基因或目的蛋白進行鑒別試驗。細胞鑒別試驗方法有多種，包括細胞形態、生物化學法（如同工酶試驗）、免疫學檢測（如組織相容性抗原、種特異性免疫血清）、細胞遺傳學檢測（如染色體核型、標記染色體檢測）、遺傳標志檢測［如DNA指紋圖譜，包括短串聯重復序列（STR）、限制片段長度多態性（RFLP PCR）和內含子多態性（EPIC-PCR）法等］以及其他方法（如雜交法、PCR法、報告基因法等）。應至少選擇上述一種或幾種方法對細胞進行種屬和細胞株間及專屬特性的鑒別。種屬鑒別可依法檢查（通則 3430）。

修改說明：

1. 刪除“新建細胞系/株的鑒別要求”

2. 更改鑒別試驗結果“確認為本細胞”為“確認所用細胞正確”

3. 更改重組細胞系的專屬特性鑒別要求的位置

4. 增加種屬鑒別依通則3430檢查

解讀：

· 種屬鑒別法（通則3430），內容均為分子類方法，并提到傳統的生物化學法，如同工酶法，準確性差，靈敏度低。

2細菌、真菌檢查

2025年版藥典：分別取混合細胞培養上清液和凍存細胞管樣品，依法檢查（通則1101），應符合規定。對于MCB及WCB培養物，至少取混合細胞培養上清液10 ml，盡可能采用薄膜過濾法檢測。對于凍存細胞，至少取凍存細胞總支數的1%或至少2支凍存細胞管（取量大者），可采用直接接種法檢測。

通則1101

• 制備好的培養基若不及時使用，應置于無菌密閉容器中，在 2~25℃、避光的環境下保存，并在經驗證的保存期內使用。

• 培養基無菌性檢查每批隨機取部分培養基。 

• 方法適用性實驗對大腸埃希菌敏感的抗生素類產品宜選用大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。

• 培養期間應定期觀察并記錄是否有菌生長。

• 實驗室應基于質量風險管理的要求，綜合評估確定日常檢驗過程中陽性對照試驗的必要性。

修改說明：

1. 更改“細菌、真菌無菌檢查”為“細菌、真菌檢查”

2. 更改“取混合細胞培養上清液或凍存細胞管樣品”為“分別取混合細胞培養上清液和凍存細胞管樣品”

3. 培養基不需要避光保存，無菌性檢查對檢查數量不做規定

4. 適用性試驗將大腸埃希菌替換為銅綠假單胞菌，但對大腸埃希菌敏感的抗生素類樣品還需用大腸埃希菌

5. 無菌檢查硫乙醇酸鹽流體培養基培養置于一個溫度即可

6. 增加了質量風險管理的要求，評估日常檢驗中陽性對照試驗的必要性

解讀：

· 需要做細胞培養上清液和凍存細胞管兩種樣品

· 與國際方法接軌，硫乙醇酸鹽培養基減少為一個培養溫度，陽性對照無強制要求

添加義翹神州小助手微信（sinobio2023），回復關鍵詞：“生物安全檢測”，即可獲取“細胞檢定項目的變化與解讀”PDF版資料>>>

義翹神州生物安全檢測平臺

義翹神州在北京和蘇州設有雙檢測中心（4200m2），并建立了生物安和CNAS認證，嚴格按照GMP、GLP和CANS規范進行設計與管理。義翹神州的檢測團隊具備扎實的生物醫學、藥學等相關專業背景，具有豐富的經驗和專業的技術能力，深刻了解并能夠隨時跟蹤中外（如NMPA、FDA、ICH、EMA等）法規及要求，可全程提供技術指導，并在項目開展之前提供相關咨詢。

義翹神州能夠提供病毒清除驗證和細胞庫檢測方案，為企業藥品申報保駕護航，助力客戶順利完成IND和BLA的國內外申報工作。截止目前，已成功完成5000+樣品的細胞庫檢測及5000多次病毒清除驗證研究，涉及的產品類型有抗體、蛋白、疫苗等。協助客戶完成近300+項目申報，申報成功率高。

免責聲明：義翹神州內容團隊僅是分享和解讀公開的研究論文及其發現，專注于介紹生物醫藥研究新進展。本文僅作信息交流用，文中觀點不代表義翹神州立場。隨著對疾病機制研究的深入，新的實驗結果或結論可能會修改或文中的描述，還請大家理解。

本文不屬于治療方案推薦，如需獲得治療方案指導，請前往正規醫院就診。