mPEG-Hyd-PEG-SH的合成需經過多步反應，包括mPEG活化、腙鍵引入和巰基修飾。優化合成工藝可提高產物純度，降低生產成本。

合成關鍵步驟：

mPEG活化：采用甲苯磺酰氯（TsCl）對mPEG末端羥基進行活化，生成活性酯中間體。此步驟需在無水條件下進行，以避免副反應。

腙鍵引入：將活化后的mPEG與水合肼反應，形成腙鍵連接體。此步驟需在低溫（0-4℃）下進行，以避免腙鍵的提前水解。

巰基修飾：通過硫醇-烯點擊化學將巰基引入PEG鏈末端。采用2-巰基乙胺作為巰基化試劑，反應效率達90%以上。此步驟可通過調整反應時間和溫度來優化巰基的引入量。

蛋白質修飾應用：

抗體偶聯：將mPEG-Hyd-PEG-SH與抗體氨基反應，形成穩定的酰胺鍵。修飾后的抗體在體內的半衰期延長至72小時，顯著優于未修飾抗體（12小時）。此外，修飾后的抗體還可通過腙鍵斷裂實現藥物的靶向釋放。

酶固定化：通過腙鍵將酶蛋白連接至固體載體，實現可逆固定與重復使用。例如，固定化葡萄糖氧化酶的活性保持率達85%以上，且可多次重復使用而不失活。

產業化挑戰：

合成過程中需控制腙鍵的立體異構化。采用手性催化劑可提高產物純度至98%以上，滿足臨床應用需求。此外，還需優化反應條件和純化工藝，以降低生產成本并提高產量。