Tips：

1. 細胞收貨出現漏液、培養瓶破損、干冰完Q揮發等異常情況時，及時拍照聯系銷售人員。

2. 若細胞出現漂浮，可以先收集瓶內細胞懸液，離心收集細胞，用胰酶消化后重新接種到新的培養瓶內，由于發貨會出現漂浮的細胞貼壁本身較弱，建議使用高貼附培養瓶或提前包被過的培養瓶培養細胞。

3. 尚恩生物T25瓶發貨的細胞內含對應細胞的完Q培養基，可以收集原裝培養瓶內培養基經1500rpm離心5min后，取上清于4℃保存用于后續細胞培養。

Tips：

1. 對于消化細胞程度，客戶如果經驗不多，無法準確掌控胰酶作用時間，建議客戶按照下述操作：胰酶首先復溫到室溫后加入細胞，放入37度培養箱，然后每隔30秒，即吹打下細胞（此時吹打細胞應盡量輕柔，不能強行將細胞吹下，否則細胞可能出現機械損傷），如果能夠吹打散細胞，說明細胞消化完成可以終止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重復操作直至能夠輕柔的吹下細胞。

2. T25瓶加10-12ml完Q培養基，10cm皿加12-15ml，2-3天換液一次。

3. 細胞收貨后首C傳代建議按1：2傳代，后續培養可以視具體細胞生長狀態和密度情況決定傳代比例。

Tips：

1. 檢測凍存細胞活性結果未合格前，培養瓶內細胞建議繼續培養直至確認凍存合格方可視需要丟棄；

2. 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用，若使用非程序凍存液可以按產品說明書處理降溫過程；

3. T25培養瓶長滿通常可以凍存2-3管，10cm皿長滿可以凍存3-4管；

Tips：

1. 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮，取出細胞時震動不要過大，水浴前一定要觀察管內是否存在液氮，若有液氮建議靜置一會待液氮完Q蒸發后再水浴；

2. 水浴時可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，可以降低管蓋縫隙滲入水導致污染的概率；

3. 水浴至剩米粒大小時及時終止水浴，避免過度水浴或水浴時間不足；

4. 建議水浴完成后直接在離心管內離心細胞，避免再次轉移細胞；

5. 復蘇后的細胞比較脆弱，吹打和轉移細胞時盡量輕柔；

細胞密度怎么計算的？

嚴格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數細胞數量，但在實際培養過程中，并不需要為了精確控制細胞數量而消化細胞計數。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養容器底部，有細胞的區域占總區域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導致并不嚴謹，但也是相當直觀、簡便的表現細胞狀態的一種方式；

NO.2培養過程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現象，只是不同細胞顆粒多少有區別，細胞培養體系不適應、營養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加，建議使用合適的培養條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產物，可以先吸走培養基后用PBS潤洗清除，再加新的培養基繼續培養。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加完Q培養基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用完Q培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

NO.3細胞具體消化時間是多久？

每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完Q規定消化時間，以實際消化效果和客戶經驗為準。