手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
灌流液
1） 無鈣灌流液：每1000ml含NaCl 8.3g、KCl 0.5g、Hepes 2.4g、NaOH（1mol/L）6ml，在37℃時，PH=7.5，滲透壓為315mOsm；
2） 膠元酶灌流液：每100ml含NaCl 0.4g、KCl 0.05g、Hepes 2.4g、CaCl2·2H2O 0.07g、NaOH（1mol/L）6.6ml、膠元酶IV 0.05g，在37℃時，PH=7.6，滲透壓為305mOsm；
3） 肝細胞洗液：100ml無鈣灌流液中加入1.5g小牛血清蛋白，在37℃時，PH=7.4。
4） PBS：每100ml含NaCl 8.0g、KCl 0.2g、CaCl2 0.1g、MgCl2·6H2O 0.1g、NaH2 PO4·2H2O 1.42g、KH2 PO4 0.2g，在37℃時，PH=7.4
方法：麻醉與手術。于大鼠腹膜腔內注射5%苯*50mg/kg，將麻醉后的大鼠仰面固定在木板上，木板下墊有吸水棉墊，剪去腹部體毛，用碘酒和酒精消毒腹部皮膚，從腹中線處剪開腹壁，暴露肝臟和與之相連的血管并找出門靜脈和下腔靜脈。將門靜脈與其相連的腸系膜和結締組織分離。用套管針以20度角在門靜脈遠端向近端平行刺入，結扎，固定套管針以封閉門靜脈遠端，立即在下腔靜脈壁上剪開一小口，以便血液和灌流后的液體從此口流出。
灌流：*步用蠕動泵將200ml無鈣灌流液經灌流管道及接在其末端的套管針泵入靜脈，10ml/min，15~20min，第二步用100ml膠元酶繼續灌流，流速5~10ml/min，保持灌流溫度在37℃。
肝臟處理：將經過灌流的肝臟從大鼠腹腔取出，用剪刀剪成0.3cm3大小的碎塊，放入燒杯，在燒杯加入肝細胞洗液100ml，置燒杯在搖床上輕搖6~10分鐘，所得的細胞懸液經孔徑為300μm的尼龍膜過濾后，倒入50ml離心管，低速離心3~5分鐘，棄上清液，再加入PBS 100~150ml，用吸管輕輕吹打沉在管底的細胞，制成肝臟細胞懸液，分離實質細胞和非實質細胞。
湖南湘立研制生產的幾款醫用離心機可以用來進行細胞分離，如DL5M/TDL5M兩種型號的低速冷凍離心機可用來進行干細胞實驗。XL03RH型控溫離心機（低速冷凍離心機）可用來進行溫度敏感型人體細胞分離。
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心