標記定量蛋白組學檢測技術服務詳情介紹

隨著蛋白質組學的發展，jǐnxiàn于對蛋白質類型及修飾的定性分析已無法滿足科研需求。在此情況下，定量蛋白質組學技術應運而生，成為近年來生命科學的研究熱點之一。蛋白質組學的定量技術是在已知蛋白類型的基礎上，結合質譜技術給出的信號強度對其表達量及豐度進行定量，可分為靶向和非靶向。其中靶向定量技術包括多重反應監測（MRM）技術和平行反應監測（PRM）技術，非靶向定量技術根據有無標記可分為非標記定量和標記定量技術，這里主要介紹標記定量技術。

標記定量的主要策略是向不同蛋白質或多肽樣品中引入具有穩定同位素標記的小分子，通過同位素標記后所產生的質量差來識別肽段的來源。在同一次質譜掃描中化學性質相同的標記肽段離子化效率和碎裂模式也相同，因此比較不同的同位素標記物的信號強度就可以計算出不同樣品中蛋白質的相對含量。根據引入同位素標記方式的不同，又可分為體內標記和體外標記兩類。

圖1 定量蛋白質組學技術分類圖

1、體內標記定量

體內標記也可以稱為新陳代謝標記。穩定同位素氨基酸細胞培養技術（SILAC）是zuì經典的體內標記定量技術，該技術的基本原理是將輕、重同位素標記的必需氨基酸（通常為賴氨酸和jīngānsuān）分別加入到細胞培養基中，經過5-6 個倍增周期，細胞內新合成的蛋白質氨基酸幾乎wánquán被穩定同位素標記，根據混合樣品中兩種同位素標記肽段呈現的峰強度或面積比例即可實現對蛋白質的jīngquè定量。

優點：標記過程與活細胞的代謝過程相結合，能夠更真實地反映生物體內的蛋白質表達情況，且無需對蛋白質進行分離純化，避免了因分離步驟而引入的誤差。•

缺點：標記效率可能受到細胞代謝狀態的影響，且標記過程易受其他代謝途徑的干擾。•

圖2 SILAC的工作流程

2、體外標記定量

基于代謝反應的體內標記定量技術存在著耗時長、價格貴等問題，因而發展出一系列體外標記定量技術，其中在樣品處理后期進行酶促標記和化學標記是當前研究的重點。

2.1酶促標記技術

這種技術通過yídànbáiméi的催化作用將一組樣品的肽段C末端16O原子替換成18O，從而使兩組樣品產生分子量的差異，通過比較標記肽段和未標記肽段的峰面積，即可對蛋白樣本進行定量。

優點：反應條件溫和，區域專一性高，且操作簡便，價格低廉。•

缺點：標記穩定性差，重復性不好，分辨率較低。•

2.2化學標記技術

化學標記是目前蛋白質組學領域中應用zuì廣泛的定量方法，它不會受到樣品來源的限制，并且可以根據肽段或者蛋白分子上不同的反應基團設計不同的化學反應，實現肽段和蛋白的定量。根據反應基團的不同，化學標記可以分為疏基標記、氨基標記和梭基標記等。其中zuì常用的是基于氨基標記的同位素標記相對和juéduì定量（iTRAQ）和串聯質量標簽（TMT）技術。

特點：標記過程可控性強，可靈活選擇標記物和標記物質，jīngquè度和準確性高。•

缺點：依賴化學反應、受環境影響較大，且標記過程可能引入誤差，對操作人員技術要求較高。•

圖3 iTRAQ/TMT技術的工作流程

蛋白質標記定量在生物醫學研究、藥物開發、疾病診斷等領域有廣泛的應用，特別是在研究蛋白質如何在不同條件下表達和調控方面。以上幾種標記方法在蛋白質定量組學中各有優劣，在選擇標記方法時，需要根據具體的研究需求、實驗條件以及樣本特性進行綜合考慮。

百泰派克生物科技BTP采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質譜平臺，Orbitrap Fusion質普平臺，Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供基于同位素標記的蛋白質標記定量技術服務（SILAC、iTRAQ和TMT），此外還有非靶向的無標記定量（Label-free）和靶向定量相關的服務（MRM、PRM），可滿足您不同的需求，歡迎咨詢。

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