熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgG資料

說(shuō)明
1．        WB對(duì)照系統(tǒng)
陽(yáng)性對(duì)照：有標(biāo)準(zhǔn)品，或陽(yáng)性血清、陽(yáng)性上清。
陰性對(duì)照：測(cè)血時(shí)用相應(yīng)小鼠未免疫血清，測(cè)培養(yǎng)上清，用無(wú)克隆培養(yǎng)上清。
空白對(duì)照：不加一抗，用1%BSA代替。
無(wú)關(guān)對(duì)照（替代對(duì)照）：用無(wú)關(guān)項(xiàng)目一抗，或無(wú)關(guān)項(xiàng)目的抗體。
2.切割膜時(shí)，大小一般為3-5mm,一抗的體積為每條膜保證1ml。
3.KSHV、MCMV、HCMV項(xiàng)目測(cè)血時(shí)，血清稀釋度為1:500-1:1000。
4. KSHV、MCMV、HCMV項(xiàng)目WB鑒定時(shí)，一抗如為IgG型,二抗采用AP-Anti mouse IgG（Whole molecule）,SIGMA,CAT#A-3562; 一抗如為IgM型，二抗采用AP-Anti mouse IgGAM,ZYMED,CAT#62-6422。
5.多肽項(xiàng)目WB鑒定，二抗全部采用AP-Anti mouse IgG（Whole molecule）,SIGMA,CAT#A-3562

Preparation of cell lysates 

Collect cells （confluent T-25） by trypsinization and spin. 
Lyse the pellet with 100 µl lysis buffer on ice for 10 min. 
For 500,000 cells, lyse with 20 µl. 
Spin at 14,000 rpm （16,000 g） in an Eppendorf microfuge for 10 min at 4°C. 
Transfer the supernatant to a new tube and discard the pellet. 
Determine the protein concentration （Bradford assay, A280, or BCA） 
（We use the Bradford assay from Bio-Rad.） 
Take x µl （= y µg protein） and mix with x µl of 2x sample buffer. 
Boil for 5 min. 
Cool at RT for 5 min. 
Flash spin to bring down condensation prior to loading gel. 

B. Polyacrylamide gel （14.5 cm x 16.5 cm）