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貂肺上皮細胞相關信息,Mv.1.Lu(NBL-7)細胞

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    2013年02月27日
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貂肺上皮細胞,Mv.1.Lu(NBL-7)細胞,Mv.1.Lu(NBL-7)細胞,貂肺上皮細胞
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資料簡介

貂肺上皮細胞相關信息,Mv.1.Lu(NBL-7)細胞

       1.玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒1402小時以上;
       2.
無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養板照射3小時以上;
       3.
培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養基內,用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養基5-10ml置培養箱內培養2-3,肉眼見無渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;
       4.
消化液(pH7.8)或其它加入液,應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,分裝成支置-20度保存;
       5.
各種炒嫻囊禾甯次率庇Ρ呷諢?否則有的液體特別是培養基容易產生沉淀.
       6.
培養箱應先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍如有紫外線的應照射1小時以上,如有高溫滅菌的應按程序來菌).至少每月一次.
       7.
進入操作時應注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時注意無菌臺內空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來往,如果數量較多,培養瓶應放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應相隔一定的距離,開瓶時應先用75%酒精反復擦拭或用燈燒,開開后應用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點.
       
復蘇:
       1.
應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-37.5,取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
       2.
在無菌臺內將*培養基加入50ml的小培養瓶內,5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養并內輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養箱內培養.
       
傳代:
       1.
貼壁細胞:
         
對于貼壁細胞應先吸盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱.50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配制強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗.
        2.
懸浮細胞:

一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心500rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養.

培養細胞的*培養基由基礎培養基(如MEM)和添加劑(如血清或無血清培養用的某些確定的激素及生長因子)組成,培養基的配方一直在改進,其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等。 


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