資料簡介
培養細胞生長減慢
可能原因
(1)由于更換不同培養液或血清
(2)培養液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。
(3)培養物中有少量細菌或真菌污染
(4)試劑保存不當
(5)接種細胞起始濃度太低
(6)細胞已老化
(7)支原體污染
建議解決方法
(1)比較新培養液與原培養液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓細胞逐漸適應新培養液。
(2)換入新鮮配制培養液,或補加谷氨酰胺及生長因子。
(3)用無抗生素培養液培養,如發現污染,丟棄培養物。或用抗生素除菌。
(4)血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存,并在2 周內用完。
(5)增加接種細胞起始濃度。
(6)換用新的保種細胞。
(7)分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物。
培養細胞死亡
可能原因
(1)培養箱內無CO2
(2)培養箱內溫度波動太大
(3)細胞凍存或復蘇過程中損傷
(4)培養液滲透壓不正確
(5)培養液種有毒代謝產物堆積
(6)更多原因參考問題4和問題7
建議解決方法
(1)檢測培養箱內CO2
(2)檢查培養箱內溫度
(3)取新的保存細胞種
(4)檢測培養液滲透壓。注意:大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260 – 350 mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓。
(5)換入新鮮培養液
(6)更多解決方法參考問題4和問題7
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