dànbáizhì組學是一門研究生物體內所有dànbáizhì及其相互作用的學科,其中dànbáizhì組的差異分析是dànbáizhì組學的重要分支,旨在比較不同生物樣本間dànbáizhì表達的差異,以揭示生物過程和疾病機制。關于dànbáizhì組的差異性分析主要有兩種方法:一種是通過二維電泳技術篩選差異蛋白,然后進行質譜分析以鑒定差異dànbáizhì相關信息;另一種是wánquán基于質譜儀的高通量測序技術,通過對蛋白多肽標記后進行定量分析尋找出差異蛋白。
二維凝膠電泳技術(2-DE)
DE是dànbáizhì組學研究中zuì早應用的技術。迄今為止,它仍是dànbáizhì組學研究中常用的分離手段。dànbáizhì組學研究的核心在于確保分離出的dànbáizhì具有高分辨率和可重復性,2-DE憑借它在分離上千dànbáizhì的同時,還能通過顯色技術對差異表達dànbáizhì進行定量分析,被廣泛應用于dànbáizhì組學研究中。它的主要步驟包括:dànbáizhì樣品制備、等電聚焦(IEF)、SDS-PAGE、染色等。
圖1 2-DE一般流程
質譜技術(MS)
在整個dànbáizhì組學研究中,準確鑒定分離蛋白是zuì關鍵的步驟。質譜鑒定技術具有高靈敏度、高通量、高時效性等特點,在dànbáizhì組學研究中一直扮演著重要的角色。傳統的質譜技術只能用于小分子量物質的分析,但隨著科技的進步質譜技術也得到了長足發展,能對更加復雜的物質進行檢測同時自動化程度和jīngquè度更高。常見dànbáizhì質譜鑒定技術有:基質輔助激光解析電離飛行質譜(MALDI-TOF-MS)、電噴霧質譜(ESI-MS)、蛋白指紋譜鑒定(PMF)、串聯質譜法(MS/MS)、液相色譜聯用質譜(LC-MS)等。
圖2 質譜技術的一般流程
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